HTRF/Alpha助力表观遗传药物的高通量筛选

哺乳动物细胞中的基因沉默通常是由DNA CpG岛甲基化以及低乙酰化和高甲基化组蛋白引起的。“写入者”（DNMT、HAT和HMT）和“擦除者”（DNA去甲基化酶、HDAC和KDM）是负责将化学基团转移到DNA或组蛋白或从DNA或组蛋白中去除的酶；MBD和其他结合蛋白是识别甲基CpG和修饰组蛋白的“读取器”。其中蛋白质精氨酸酶甲基转移酶5(protein arginase methyltransferase 5, PRMT5) 是一种II型精氨酸甲基转移酶，能够催化组蛋白和非组蛋白上的精氨酸残基进行对称二甲基化，在细胞增殖、炎症、肿瘤发生等多种疾病中起重要作用。

2016年的两篇背靠背《Science》文章首次报道了抑制PRMT5在MTAP缺失肿瘤中的合成致死效应，随后几年PRMT5在癌症治疗领域愈发表现出巨大潜力，并有望成为治疗MTAP缺失肿瘤的新一代靶向药物，越来越多的药企和科研机构开始致力于PRMT5抑制剂的研究，目前已有三十多个PRMT5抑制剂在研。均相检测技术HTRF以及AlphaLISA为PRMT5抑制剂的发现提供了高效的高通量筛选平台。

如图所示，该文章利用HTRF技术建立了基于PRMT5甲基转移酶活的1536孔板高通量筛选平台，对370,000个化合物进行初步筛选，并进行放射性酶活检测方法正交验证，最后获得的一组化合物展现出IC50 0.4–7μM的抑制效果，其中EPZ015666在两种皮下成瘤（套淋巴细胞瘤，MCL）动物模型中呈现剂量依赖性的肿瘤抑制作用。目前EPZ015666 (GSK3235025)还在临床前研究中。

此外， AlphaLISA方法同样适用于甲基转移酶活高通量筛选平台的搭建。HTRF/AlphaLISA两种均相检测技术具有高效免洗，适配全自动加样工作站的优势，帮助科学家加速新药发现。