24 小时全程自动化！Opentrons Flex 自动化移液工作站轻松制备质粒文库

高通量基因组分析是生命科学研究中不可或缺的重要工具，这项技术在推动科研进步方面发挥着至关重要的作用。为了满足科研领域对高效、准确制备方法的迫切需求，seqWell 的 Express PlexTM Library Kit 提供了一种专门用于高通量制备质粒和扩增子文库的解决方案。

在传统的手工制备文库方法中，完成 96 个样品的制备需要耗费长达 90 分钟的时间，其中手动操作时间占据了 30 分钟。这种方式不仅效率低下，还容易因为人为因素引入误差。

为了改进这一状况，本文对比了两种文库制备方法，一种是在 Opentrons Flex™ 移液工作站上使用 seqWell ExpressPlex™ Library Kit ，另一种是手工制备文库。

通过结合 Flex 移液工作站与 seqWell ExpressPlex™ Library Kit，我们可以显著缩短文库制备时间，提高样本通量。这种自动化的解决方案不仅提升了制备效率，还降低了产生人为误差的风险，为生命科学研究提供了更为可靠、高效的工具。

材料与方法

根据 Express Plex 的工作流程，我们在 Flex 自动化移液工作站上进行文库制备。实验过程中，我们输入 16 ng 的 pUC19 ，再将所有组分加入反应板 ， 用 3000 rpm 的转速混匀 90 秒，然后进行后续的文库制备和混合步骤。之后在 NextSeq 2000 测序仪上对最终的文库进行 2X150 bp 测序。

工作流程展示

A）ExpressPlex 工作流程包括将 index 和 DNA 加入反应板（已含有酶等混合物），然后进行扩增、混合和 MAGwise 磁珠纯化；

B）Flex 工作站包括吸头盒、模块、转板抓手和其他配件；

C）Flex 工作站板位设置，用于在扩增后将 4 个反应板进行文库混合。

应用实验结果

A）结果显示 96 孔板中文库 Read Count 变异系数（CV）为 12.7%；

B）95% 的文库数据通过了数据预处理，为高质量数据，且超过 90% 文库质量得分达到 Q30；

C）由 Flex 制备的文库比手动制备的文库浓度更高。

利用错开的开始时间，可以在 Opentrons FlexTM 上 3 小时内制备 8 个独立的 96 混 1 文库。在 Flex 上设置第一块反应板后，可以在 24 小时内完成 768 个文库的制备。

应用实验结论

在 Flex 移液工作站上制备的 96 个 pUC19 质粒样本文库呈现出了高度均一的质量，充分证明了 Flex 平台在自动化文库制备方面的卓越性能。

与手动制备相比，自动化文库制备不仅稳定性更佳，而且文库浓度更高。此外，超过 95% 的读数成功通过测序仪质检 PF，这进一步验证了自动化制备流程的高效性和准确性。

Flex 移液工作站支持在单次运行中处理多达 384 个样本，极大地提高了样本处理效率。通过合理安排时间，我们甚至可以在 24 小时内处理高达 768 个样本，从而满足大规模高通量基因组分析的需求。

在 Flex 平台上进行自动化 ExpressPlex™ Library Prep Kit 工作流程，我们实现了从提取的质粒/扩增子DNA 到数据生成的全流程自动化。这一解决方案不仅简化了操作步骤，降低了人为误差，而且显著提高了实验效率和数据质量，为生命科学研究领域的发展注入了新的动力。

参考文献

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1. ExpressPlex™  Library Prep Kit Single-Step Workflow Demo for High-Throughput

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preparation method for multiplexed plasmid and amplicon sequencing. Library Prep

Simplified through Scalable Workflows | seqWell. https://seqwell.com/wp-content

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4. Palys, J., Pearson, A., Whitmore, I., & Rees, H. (2023). High-Throughput NGS Library Prep for Plasmids and Amplicons with the ExpressPlex™ Library Preparation Kit on the SPT Labtech firefly®.

5. SeqWell Inc. (2023). ExpressPlex™ Library Prep Kit. Library Prep Simplified through Scalable     Workflows | seqWell. https://seqwell.com/wp-content/uploads/2023/04/SW2023_ExpressPlex- Product-Flyer-04202023.pdf

若需深入了解 Opentrons Flex 自动化移液工作站轻松制备质粒文库内容，以及更多具体的应用案例、实验数据和优化技巧，请访问  Opentrons 官网“资源” - “知识中心”页面，获取详细应用笔记。

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