色谱柱不好用？？都是“溶剂效应”惹的祸

 前言

在液相实验中，有没有遇到过色谱峰分叉、峰展宽的现象？在进行问题排查时，首先可能想到是不是色谱柱有问题？但往往我们排查过后发现是“溶剂效应”惹的祸。

“溶剂效应”是由于样品中目标组分在溶剂与流动相中所处状态存在差异，进而对色谱保留行为造成影响，导致色谱峰展宽、分叉、保留时间漂移等现象。常见的引起“溶剂效应”原因有溶剂强度、溶剂与流动相的兼容性或电离状态等。

本文以麻黄样品中盐酸麻黄碱的检测为案例，看看“溶剂与流动相的不兼容”对检测结果的影响及解决方案吧。

结果与讨论

①  分析条件

仪    器：S6000高效液相色谱仪

色 谱 柱：Alphasil XD-Ph, 4.6 × 250 mm, 5 μm, 100 Å

流 动 相：甲醇：0.092%磷酸水溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）=1.5:98.5

柱    温：30 ℃

流    速：1.0 mL/min

进 样 量：10 μL

检测波长：210 nm

②   结果与讨论

实验过程中发现标准品溶剂和样品溶剂均与流动相条件存在较大差异，理论分析这2个差异均会造成色谱峰形异常。判断依据如下：对照品溶剂为100%甲醇，洗脱强度远大于流动相，可能会造成部分化合物保留时间提前，影响峰形。样品溶剂为1.44%磷酸水溶液，样品溶剂的pH值与流动相的pH值存在差异，可能会对化合物电离状态造成影响，进而影响峰形。

实验结果如下图所示，标准品中盐酸麻黄碱的峰形良好，但是样品中盐酸麻黄碱峰的峰形异常且保留时间漂移。表明该实验条件下强溶剂效应不会对盐酸麻黄碱峰造成影响，而样品溶剂与流动相pH差异对盐酸麻黄碱峰形有较大影响。为了验证猜想，尝试将样品溶剂更换为100%甲醇进行验证。

图1  标准品和麻黄样品（不同溶剂）的对比色谱图

（峰1：盐酸麻黄碱；峰2：盐酸伪麻黄碱）

样品溶剂为100%甲醇的结果如下图所示，盐酸麻黄碱峰的峰形正常且保留时间不漂移。进一步说明是样品溶剂与流动相不匹配导致了盐酸麻黄碱峰形异常和保留时间漂移现象。

图2  标准品和麻黄样品的对比色谱图

（峰1：盐酸麻黄碱；峰2：盐酸伪麻黄碱）

而查阅麻黄样品中盐酸麻黄碱检测的相关标准发现，前处理方法均含有水相提取步骤，为避免使用100%甲醇做样品溶剂可能导致样品提取不充分的问题，同时降低强溶剂效应带来的影响，提高方法耐用性。参考《麻黄配方颗粒》标准，使用70%甲醇水作为样品溶剂，考察盐酸麻黄碱峰形情况。结果如下图所示，样品中盐酸麻黄碱峰的峰形正常。

图3  麻黄样品（溶剂：70%甲醇）色谱图

（峰1：盐酸麻黄碱；峰2：盐酸伪麻黄碱）

结论

本实验以麻黄样品中盐酸麻黄碱的检测为案例，验证了样品溶剂与流动相不匹配可能会造成峰形异常和保留时间漂移。通过本实验，我们旨在给大家提供一个思路，当遇到峰形异常或者保留时间漂移的情况，可以考察下样品溶剂的影响。

色谱柱信息