技术问答｜污染看得见？解密荧光PCR如何控制污染，提高灵敏度！

2024-03-08 20:13:37, 生物医药市场部 1有限公司

荧光PCR是在常规PCR的基础上加入荧光染料或荧光素，在PCR扩增的同时表征PCR扩增的数量和速度，因此，相较于普通检测技术，荧光PCR是一项灵敏度极高的快速检测手段，为检测痕量核酸提供了可能。正因为此特点，该技术被广泛应用于法医、生物医药、体外诊断试剂等需求高检测灵敏度的行业。但高灵敏度也会为使用者带来一个困扰，那便是普遍存在的污染现象。

在梳理应对污染的做法之外，本期我们为您呈现微谱生物安全实验室的标准化操作，揭示如何做到污染控制、确保测试实验的高灵敏度。

什么是污染？

contaminate

小

微

荧光PCR的污染一般指含检测靶标区域的核酸污染。在实际的实验过程中表现出来的直观结果便是阴性对照有阳性扩增信号，如下图所示。此类现象会导致无法判断待检样本的正确结果。

图1 实验中阴性对照的污染现象

-气溶胶污染

图2 实验中阴性对照的污染现象

-试剂污染

污染产生的原因是什么？

Cause

小

微

常见的污染主要分为三类，第一类是气溶胶污染、第二类是试剂污染、第三类是仪器或耗材污染。

高浓度核酸样本抽提造成的污染是在对待检样本进行核酸抽提时因加热、震荡等物理因素导致的核酸挥发现象造成的。

PCR产物逸出主要是因操作者进行上机操作时管盖未盖紧或取出产物时管盖被打开形成。

空气流向错误指整个阴性试剂配制室与阳性房间空气进行了交换，包括但不限于未区分阴性房间和阳性房间；两个区域的空调或送风系统相连；人员走出阳性房间后未做任何处理便进入阴性房间等。

试剂污染的特征为多次重复实验，检测结果基本一致，如图2所示。即便更换了新的实验室后，污染依然存在。试剂污染形成的主要原因如下：气溶胶污染溶解于试剂、试剂出厂污染等。

仪器或耗材污染与试剂污染类似，是污染物黏附于仪器或者耗材表面，在使用时可能重新溶解进入检测体系，导致污染的发生。

解决方案？

Solution

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日常须保持实验室操作环境清洁，固定周期进行深度清洁。
时刻注意空气流通状况。注意实验操作手法，保持防污染意识。
进行高污染风险操作前应审慎评估每一步骤的污染风险，精细化操作。
一旦产生污染，应立即处理控制，避免污染面扩大。

经典案例？

Classic Case

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微谱生物安全实验室严格参照GMP体系规范运营，试剂盒产品研发和生产均参照ISO 13485体系进行。

我们恪守实验室操作规范文件要求，每次实验前和实验后均对实验台面以75%酒精喷洒、擦拭，并对使用过的超净工作台和生物安全柜进行紫外辐照30min灭菌，以洁净实验室确保测试实验的高灵敏度。

此外，定期对空气循环系统进行严格检查，防止阳性区与阴性区空气发生流通现象。

规范操作、观念先育、意识先行，微谱对每一名新员工均开展全方面的理论和实践培训；同时以“老带新”方式开展实验操作，考试合格方可持证上岗。

对防污染要求规范的严格执行，是微谱生物科技获得客户认可的基石，也是我们试剂盒产品性能深得客户青睐的首要保证。

成功项目经验？

Successful Program

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微谱生物科技依托成熟的技术研发体系，成功开发了多种荧光PCR类试剂盒：

支原体检测试剂盒

HEK293细胞残留DNA检测试剂盒

Vero细胞残留DNA检测试剂盒

大肠杆菌残留DNA检测试剂盒

CHO细胞DNA残留检测试剂盒

SF9细胞DNA残留检测试剂盒

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我们的优势有哪些？

Our Advantages

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微谱生物科技可以为客户提供符合法规要求的研究方案，我们拥有齐全且经过验证的研究方法（qPCR、TCID50、Plaque assay），研究全程遵循GMP/ISO双质量体系要求，病毒齐全且指示病毒滴度可达8log10TCID50，覆盖工艺过程齐全（low pH S/D 纳滤、层析、干热法等）。在项目实施中，我们时刻与客户保持信息同频，助力缩短研究周期，加快产品上市！

THE END

关于我们

微谱于2014年正式涉足生物制品服务领域，2019年成立微谱生物科技有限公司，成为集团在生物药领域的重要战略布局。2022年公司荣获“江苏省民营科技企业”称号。

微谱生物科技立足于生物医药全产业链，依托创新型自主知识产权体系构建出成熟的生物制品质量研究平台、生物安全服务平台、GMP验证及法规咨询服务平台、药包材研究服务平台以及药械知识产权服务平台，致力于为国内外生物药企业提供合规、专业、一体化的生物制品质量与安全研究综合解决方案。