问答小课堂｜关于液相色谱柱使用中的常见问题解答

关于液相色谱柱使用中的

常见问题解答

采用纯有机试剂（如甲醇、乙腈），从0.1mL/min流速慢慢提高到正常使用流速，冲洗总体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到最好状态，并观察压力和基线状态。

柱体积计算参照公式：

常见的色谱柱规格的柱体积计算如下：

正相色谱柱 (SIL, DIOL，CN，NH2）封存溶剂与质控方法相关，不同的封存溶剂活化存在差异，以岛津现有的色谱柱为例，具体活化方法如下：（可点击预览大图）

不同方法如下：

采用HILIC模式对样品进行分离分析，一般用于分离大极性化合物，因此对于极性大、吸附太强的杂质，常规清洗效果不明显，可以加大水比例，增加洗脱强度，先用纯水：乙腈=50:50，清洗20倍柱体积，然后梯度过渡到95%乙腈清洗，并最终保存在该流动相中。

当流动相中使用了时间长，且缓冲盐使用较多；或者等度高比例水相一段时间造成了柱头严重污染，常规的冲洗难以达到一个好的效果，此时可以进行反冲。

除非特殊情况，一般选择填料基质与分析柱基质完全相同的保护柱保护柱，确保，确保分离选择性一致；规格选择方面，尽量选择粒径一致或者相近的保护柱，且耐压符合要求，保护柱体积按分析柱体积的5%~10%，保护柱内径应与分析柱内径相同或相当。

保护柱的再生一般采用，取下保护柱，在不打开卡套的前提下将保护柱反接（注意此时不能接色谱柱），用10%甲醇水冲洗  30min，然后再用纯甲醇冲洗30min。

四氢呋喃（THF）在反相色谱中，洗脱能力比甲醇和乙腈要强。实验结果表明，在流动相中加入THF能改善某些难分离的物质的分离度及峰形。

但是THF也存在不稳定，易降解生成过氧化物，从而导致峰形拖尾、峰分裂以及鬼峰；同时过氧化物还可与填料发生化学作用，一定程度上，THF会对柱子造成损伤，而且这种损伤随着时间而累积；再者THF对PEEK有腐蚀作用，因此添加浓度一般不超过20%。

1. 梯度变化造成的，在紫外低波长检测的条件下会更容易出现，这种鬼峰比较固定；一般磷酸盐体系更容易出现鬼峰，建议添加鬼峰捕集小柱去除。

2. 仪器中管路有气泡也会容易产生鬼峰，但这种鬼峰一般保留时间不固定，在进行实验的时候，首先对流动相进行脱气处理，同时更换流动相后，对仪器管线进行Purge。

样品的降解变质，以及样品本身可能带有的，但因样品批次问题可能不固定出现；需要进一步的排查。

流动相、仪器系统（包括手动进样的进样针）、色谱柱或样品污染带来的，需要冲洗液相色谱系统。

残留在柱子上，前一阵洗脱不完全导致在下一针出峰，从而导致鬼峰，建议更换洗针液。

在线过滤器内的滤芯是具有一定孔径的筛板，死体积更小，只能过滤掉一些大于筛板孔径的杂质。清洗的时候，只要取下筛板超声即可。

保护柱的卡套中放置的是保护柱芯，柱芯内有填料，相较于在线过滤器，死体积更大。保护柱芯不仅能过滤固体杂质，还能吸附一些强极性、强酸性或者强碱性的物质，防止色谱柱内填料的污染，可以对色谱柱进行全方位的保护。

通常液相色谱柱的柱头也有不同类型，常见的有HSS型以及W型，最大的差别在于连接所用的接头管线伸出来长度有差异，HSS型为2.4mm,W型则为3.3mm。当使用一些不锈钢接头的时候，接头卡死导致伸出长度固定，难以匹配不同类型色谱柱。

选择岛津杂化耐高压接头，最高耐压82Mpa，接头不会卡死，灵活匹配各种柱头类型，搭配手拧工具，轻松搞定连接。

岛津全新升级推出鬼峰吸滤头—GLC Suction Filter 2，代替原有砂芯滤头，在不增加仪器系统体积的同时，滤头中的填料起到有效净化流动相，吸附流动相中有机杂质，从而消除鬼峰。