2024-02-05 10:53:39, 钟旭 艾杰尔-飞诺美(Agela & Phenomenex)
避免管路过长,内径过大造成的管路内部谱带展宽
图1. 管路内径对于样品扩散的影响
流通池体积的优化
流通池体积偏大,同样会造成待测物的扩散,从而形成谱带展宽使呈现出的柱效偏低,如下表所示,我们考察了不同液相系统在相同条件下对Luna Omega Polar C18(3μm, 4.6*150mm)进行柱效测试,结果显示,具有小体积流通池的液相系统获得了更高的柱效,同时需要注意的是,具有标准体积流通池的系统C和D所呈现出的柱效差异,表明不能忽视系统管路死体积带来的影响,二者对于柱效的影响是相辅相成的。
图2. 流通池体积对于峰展宽的影响
表1. 不同体积流通池的液相系统柱效测试对比
色谱柱 | Luna Omega Polar C18; 3μm, 4.6*150mm | |||
色谱条件 | 乙腈-水 70:30; 1.8mL/min; 25℃; 5Hz | |||
仪器 | 系统A | 系统B | 系统C | 系统D |
流通池体积 | 500nL | 5μL | 14μL | 12μL |
柱效 | 25314 | 16699 | 14369 | 12430 |
最容易被忽视的采集频率的设置
一般而言,为了准确描绘出一个色谱峰,理想状态下至少需要采集20个数据点;尤其对于核-壳类色谱柱而言,其本身就具有柱死体积更小,柱效更高的特点,常规用于全多孔色谱柱5Hz的采集频率并不能发挥其最大柱效优势,适当提高采集频率(例如10-20Hz)可获得更佳的分离性能,但同时需要避免过高采集频率带来的基线毛刺波动。
图3. 采集频率对于峰形和柱效的影响
表2. 不同采集频率下的柱效对比
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