2023-12-02 11:41:39, 安捷伦细胞分析 安捷伦细胞分析事业部(BioTek)
体外杀伤知多少
体外杀伤实验是肿瘤细胞疗法的重要筛选和评估手段,大家常用的方法有流式、LDH或者基于Luc等终点法。但这些方法对于效应细胞重复杀伤检测来说,你是不是觉得过于繁复。不仅要准备过多的样品/复孔,还需要手动去检测每轮的杀伤,而且很难保证持续监测同一样品孔的多轮次重复杀伤。
注意啦!注意啦!RTCA要放大招啦!
安捷伦xCELLigence RTCA实时细胞分析仪只需简单的步骤就可以实现同一样本孔效应细胞对靶细胞的多轮次杀伤检测(图1)。而且作为无标记的检测,杀伤结束后的细胞还可以用于其他实验的检测,比如流式等。
图1. xCELLigence RTCA检测效应细胞重复杀伤的workflow
案例1:实体瘤靶细胞重复杀伤以及T细胞免疫分型检测
RTCA检测 5 轮次重复杀伤AcPC-1靶细胞
分别将ho2R和ho9R武装的anti-MSLN M5 CAR T细胞按照E/T ratio=1:1加入到胰腺癌细胞系AsPC-1中进行5轮次的持续重复杀伤检测,每轮杀伤48h,然后将上一轮杀伤后的CAR T细胞重新计数再按照E/T ratio=1:1 加入到新接种的胰腺癌细胞系AsPC-1中。
结果显示前三次杀伤中ho2R和ho9R两种武装分子并没有区别,而在第四次开始ho9R武装的CAR T细胞杀伤更强,更快的清除孔中的肿瘤细胞。表明ho9R武装增强CAR T细胞的持久性。
流式检测重复杀伤后 CAR T细胞的免疫分型
由于RTCA是无标记的检测,收集最后一轮杀伤结束后的CAR T细胞,应用流式细胞仪检测CD45RA、CD27、CCR7以及CD95等Marker来鉴定T细胞记忆干细胞Tscm的比例。
如猜想的一致,ho9R武装的anti-MSLN M5 CAR T细胞持久性更高的原因是其增加了CAR T细胞中Tscm细胞的比例,因此增强了CAR T的干细胞特性。
参考文献:Potentiating adoptive cell therapy using synthetic IL-9 receptors. Nature 607, 360–365 (2022).
案例2:血液瘤靶细胞重复杀伤以及T细胞耗竭Marker的检测
RTCA检测 4 轮次重复杀伤Nalm6悬浮靶细胞
利用Agilent IMT kit预孵育E-plate检测板,使人B淋巴白血病细胞Nalm6细胞贴壁生长,分别将不同E/T比的不同组CAR T细胞加入到Nalm6靶细胞中进行4轮次的持续重复杀伤检测,每轮杀伤检测24h,然后将上一轮杀伤后的CAR T细胞重新计数再按照相同E/T ratio加入到新接种的Nalm6中。
结果表明Sana公司构建的低免通用型CAR T细胞HIP CAR T的体外持久杀伤能力与传统通用型Allo CAR T细胞无差异。
流式检测重复杀伤后 CAR T细胞耗竭Marker的表达
RTCA检测CAR T细胞使无标记无损伤的检测方法,研究者在最后一轮杀伤结束后检测CAR T细胞的耗竭Marker: TIM3、TIGIT、LAG3、CD39、CTLA-4以及PD-1的表达。
结果也表明Sana公司构建的低免通用型CAR T细胞HIP CAR T的耗竭水平与传统通用型Allo CAR T细胞无差异。因此这种低免疫设计在增加通用型细胞治疗产品的安全性的同时也没有影响产品的体外效力和持久性。
参考文献:Hypoimmune anti-CD19 chimeric antigen receptor T cells provide lasting tumor control in fully immunocompetent allogeneic humanized mice. Nature Communications 14, 2020 (2023) .
04-18 德国元素
Moku时间间隔与频率分析仪发布!表征和控制系统应用的全面解决方案。04-18 圈内人都会关注
拒绝网络谣言,守护清朗园区04-18 国产精密仪器厂家
橙达仪器受邀参加中国化学会第十八届全国有机合成化学学术研讨会04-17 Orienda
以旧换新 │福禄克助力测试测量仪器提质焕新04-17 福禄克公司
直播邀约 | 2024新版新功率理论及标准详情解读04-17 福禄克公司
直播邀约 | 保障网络稳定安全,高标准机房都在这样做04-17 福禄克公司
福禄克计量校准部新品发布会—北京场04-17 福禄克公司
如何以科技助力高校发展?郑州这场会有答案04-17 市场部
英诺德德国慕尼黑首秀告捷,以创新点亮Smart Lab主题04-17 市场部
探讨水资源保护:薄膜微萃取法检测地表水中的农药04-17 英诺德INNOTEG
肿瘤防治宣传周——科学防治,精准检测04-17 赛默飞基因科学
展会回顾 | 2024 CBIFS 食品安全技术论坛04-17 Restek
精彩回放:CBIFS 食品安全技术论坛圆满落幕!04-17
STTT | 北京协和医院发现胰腺囊性肿瘤新型囊液糖蛋白标志物04-17
聚焦丨TRT-V8000隧道超前地质预报新品发布暨隧道检测技术交流会精彩回顾04-17 物探部
【聚焦激光】Ophir5款激光功率表头,您所期待的,这里都有!04-17
皖仪科技Analytica2024,闪耀慕尼黑,走出国际范儿!04-17 WAYEAL皖仪
Argolight荧光显微镜校准片免费试用!04-17 圈内人都会关注
质在精准,谱于“英”用 —— “专家云讲堂”临床质谱精准营养专题今晚开播!04-17