诺奖青睐的mRNA，有没有新方法可高效大量合成？

2023-10-31 14:38:59, 赛默飞生命科学赛默飞世尔科技生命科学产品

瑞典卡罗琳医学院10月2日宣布，今年的诺贝尔生理学或医学奖颁发给匈牙利科学家卡塔林·卡里科（Katalin Karikó）和美国科学家德鲁·韦斯曼（Drew Weissman），这两位获奖者关于核苷碱基修饰方面的发现，使开发针对新冠感染的有效mRNA疫苗成为可能。在分子生物学领域，DNA是生物体内存储遗传信息的分子，在转录成为mRNA后，才可以被翻译成蛋白质。

其实，mRNA 技术用途极为广泛，除了可用于制备疫苗，还可用于基因编辑、蛋白质替代疗法、细胞工程改造等多种研究场景。体外转录可以说是mRNA研究中经典的一步，提高mRNA加帽效率、翻译效率，是体外合成加帽mRNA始终追求的目标。

赛默飞隆重推出新一代体外转录试剂盒，mMESSAGE mMACHINE™ T7 mRNA Kit with CleanCap™ Reagent AG，搭配第三代帽（人类中发现的天然帽）CleanCap Reagent AG 可实现最佳共转录mRNA 合成。

mRNA高产量

使用该试剂盒，每反应可获得100-120ug mRNA, 产量是加ARCA 帽类似物的mMESSAGE mMACHINE T7 ULTRA 转录试剂盒所得mRNA 量的5 倍，且是主要竞品mRNA 试剂盒与CleanCap Reagent AG 所得mRNA 量的1.5 倍。

（上下滑动）图1. 对于标准的20 _L 反应，mMESSAGE mMACHINE T7 mRNA 试剂盒与CleanCap Reagent AG 可实现＞ 5 mg/mL 或＞ 100 ug 的mRNA产量。图中的红色条是使用不同IVT 试剂盒时5 种不同模板的平均产量。不同的彩色点表示每个模板的平均mRNA 产量。DNA 模板备注：绿色，绿色荧光蛋白（GFP）（1kb）；蓝色，Cas9（5kb）；橙色，gaussia 荧光素酶（0.8kb）；黄色，萤火虫荧光素酶（2kb）；黑色，VEE 自扩增GFP（10kb）。用每种mRNA 试剂盒对每个模板进行3 次重复试验。

mRNA高活性

与具有ARCA 帽类似物的mMESSAGE mMACHINE T7 ULTRA 转录试剂盒得到的mRNA对比，该试剂盒转录得到的mRNA活性更高，并且与由主要竞品mRNA 试剂盒与CleanCap Reagent AG 制成的mRNA 的细胞性能相当。

（上下滑动）图2. 对于本实验，通过每种mRNA 试剂盒制备 fLuc mRNA，之后使用Invitrogen™ Lipofectamine™ MessengerMAX™ 转染试剂将25 ng mRNA 转染至A549 人肺癌上皮细胞。24 小时后，使用Thermo Scientific™ Pierce™ 萤火虫Luc 一步法辉光检测试剂盒（RLU：相对光单位）测定细胞的荧光素酶活性。

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