原来一个小小的蛋白marker还有这么多讲究

2023-10-12 14:19:30, 赛默飞生命科学赛默飞世尔科技生命科学产品

蛋白Marker或蛋白标准品是生化实验中最常用的试剂之一，用来估计通过凝胶电泳（例如 SDS-PAGE）分离的蛋白质的大小，是蛋白表达、纯化和分析实验离不开的，也是大多数实验室日常配备的基础试剂之一。

Thermo Scientific PageRuler预染蛋白Marker是市面上最早推出的颜色明亮、条带清晰的预染蛋白marker之一，自2000年初第一代产品上市以来，深受广大科研人员信赖：

20多年深厚经验
2万篇引用文献
数百万忠实用户

作为人见人爱的经典产品，PageRuler预染蛋白 Marker具有以下突出优势：

颜色清晰，易于观测
条带锐利，分布均匀
上样量少，高性价比

PageRuler预染蛋白marker口碑爆棚、好评如潮：

“PageRuler预染蛋白marker就是亮，之前试过别的品牌，都没有PageRuler条带锐利，现在都固定用它了”

“说明书推荐上样5 μL，但我们平时省着用上2 μL，效果也一样很棒”

“条带很清晰、好分辨，转膜效率也优秀，性价比冠军了”

“用起来很方便，用量也挺省的，每次搞活动我们实验室都囤一些，大包装平均下来非常划算”

“26616，YYDS”

“Pageruler系列蛋白marker性质稳定，条带清晰，准确，锐利，大小精准，无论做考染还是wb都非常理想”

干

货

时

间

蛋白marker常见问题解析

蛋白marker是日常实验很常用的试剂，下面我们来一起看看使用过程中都有哪些常见问题吧。

为什么在不同凝胶体系中，蛋白分子量标准的迁移特性会有所不同？

当相同的蛋白质在不同的SDS-PAGE缓冲系统（如 Bis-Tris 和 Tris-甘氨酸）中运行时，蛋白质的迁移率会产生轻微差异。每种 SDS-PAGE 缓冲系统均具有不同的 pH 值，因而会影响蛋白质的电荷及其与 SDS 的结合能力。蛋白质迁移率的变化程度在天然蛋白质中通常很小，但对于非典型或化学修饰的蛋白质，如预染蛋白Marker，其变化更为明显。

为什么同一蛋白Marker在不同凝胶体系中的分子量会不一样？如果我想知道精准蛋白分子量该怎么办？

由于问题1中所述的蛋白迁移特性，所有预染蛋白Marker的表观分子量都会因缓冲条件的不同而发生变化，所以应根据所用凝胶体系使用相匹配的表观分子量，来更准确地定位您的目标蛋白。如需查看赛默飞蛋白Marker在各凝胶体系中的表观分子量，请见产品说明书中的迁移模式示意图（Migration Patterns）。

如果需要精准测定目标蛋白的分子量，推荐使用非预染蛋白Marker。两大类蛋白Marker的推荐使用情形对比请见下表：

请问PageRuler预染蛋白marker使用时有什么注意事项吗？

由于Marker中含有SDS，其在低温下易析出，因此marker在上样前，需要在室温进行回温（如20-25℃回温5-10分钟），并在上样前要充分轻柔混匀；避免低温操作，可有效减少异常条带的出现；
上样时使用无蛋白酶的吸头（如高压灭菌过的吸头）进行上样，避免蛋白酶引起蛋白降解，从而导致不可逆的条带弥散；
对于小胶（如8cm x 8cm），保证marker上样量在1.0mm厚的胶中上样至少5 μL，1.5mm厚的胶上样至少10 μL；
切勿煮沸或高温孵育。

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