如何有效解决HPLC漏气/液问题？

2023-07-26 11:22:55, 基泰生物上海基泰生物科技有限公司

如何有效解决HPLC漏气/液问题

对于操作人员来说，漏液是一件让人苦恼的事情，因为有些漏液问题比较直观，容易解决，但有些漏液问题比较复杂，需要深入排查。今天小编就和大家聊一聊液相色谱漏液如何解决。

漏气，漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部了的气体进入液相色谱仪的流路内部形成气泡。下面按流路的方向逐个部件分析产生气泡的原因和相应解决方法。

1 过滤头

做油液时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气（需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率），如果已脱气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。

2 透明流路管

指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因（我们做液相一定要有“微渗”的概论）。如果长时间不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出来的。这种情况对于输送泵很危险，因为泵从设计来说是输送液体而不是输送气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。

对于这种情况，要突出“预防为主”如：液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭配资源，每台机一周至少一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2小时。养成良好的工作习惯很重要。

如果流路管中真漏气了怎么办？

我的建议是用外力使管路中充满液体。具体如下：

1、找到流路管进入输送泵的接头。

2、拧下来。

3、用一干净洗耳球的尖端对准管路的平整切口。

4、吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5cm左右时停止该动作。

5、快速把接头拧回输送泵上（这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象）。

6、开机，打开排液阀门，启动输送泵。

7、等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。

3 输送泵和柱子

入口/出口单向阀出现问题

入口/出口单向阀出现问题可更换新的阀芯，查看是否继续漏液，更换时注意阀芯的方向是流动相流动的方向（切记方向不要放反）。

入口/出口单向阀未拧紧

用扳手适当拧紧入口/出口单向阀，直到液体不再往外流出。

连接主泵头与平衡泵头的U型连接管处出现泄漏

U型管出现泄漏，可尝试用扳手适当拧紧U型管的固定螺丝。

4 柱塞密封圈

柱塞密封圈泄漏主要是由于流动相中盐项析出磨损柱塞密封圈导致，为防止此现象发生，一定不要让后密封清洗溶液走空，否则等待你的就是使用牛角注射器吸取后密封清洗管路溶液了。

5 自动进样器

针座密封泄漏

成千上万次的进样后，针座密封磨损严重，导致密封不紧，需更换进样针座密封垫。

进样针弯曲

当进样针触碰障碍物后，会导致进样针弯曲，当进样针扎入进样针座，也会导致密封不紧，从而产生漏液，此时需将进样针拆下进行维护或者更换。

进样针与样品环（sample loop）

连接松动当六通阀切换到进样状态时，有溶液从进样针流下，就是进样针与sample loop连接松动导致，此时需将进样针拆下，重新紧固连接处即可。

6 检测器

应该说，整个流路中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的信号反映，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。如果检测器内有残留气泡，会有特别明显的表现形式，就是在走基线时会时不时间隔出现直上直下信号很大的信号峰。这时先看普通流量能否冲走，如果冲不走，那唯一的办法就是拆柱，把检测器直接连接到输送泵的出口，加大几部流量冲洗，则肯定能冲走气泡。

一般我们所说的液相色谱漏液主要是以下几个部分的漏液：接头处漏液、进样阀漏液、泵漏液、检测器漏液、色谱柱漏液五个部分，下面我对每一部分漏液都进行一个简单介绍。

1、接头处漏液

接头处松动→拧紧

接头磨损→更换

接头过紧→拧松后重新拧紧或更换

接头污染→拆下清洗或更换

部件不匹配→使用同一品牌的配件

2、进样阀漏液

转子密封损坏→重新安装或更换进样阀

定量环阻塞→更换定量环

进样口密封松动→调整

进样针头尺寸不合适→使用恰当的进样针