【震撼亮相】宿主残留DNA精准检测方案全新上市

2023-07-21 15:59:31


生物制品(包括重组蛋白药、抗体药、疫苗等)多是使用非人源的连续传代菌株或细胞株来表达生产,即使经过严格的纯化工艺仍然容易在成品中残留宿主细胞的核酸片段。这些外源性核酸残留可能存在诸多安全隐患(如感染性、致瘤性、免疫原性和致突变性)。

《中国药典》(2020年版三部通则3047)规定:细胞基质生产的生物制品DNA残留量不高于100 pg/剂;细菌或真菌基质生产的制剂DNA残留量不超过10 ng/剂。

《中国药典》将定量qPCR法作为生物制品宿主残留DNA检测的标准方法之一。定量qPCR法具有序列特异性高、灵敏度高、重现性好,定量检测等优点,目前已经成为宿主细胞残留DNA检测的主流方法之一。


TIANGEN聚焦生物制药上游环节,结合自身在国内核酸提取和纯化领域多年积攒的丰富经验,自主研发推出生物制品宿主细胞残留DNA检测整体解决方案:

● 磁珠法宿主残留DNA提取试剂盒(HD101)

● Vero残留DNA检测试剂盒(探针qPCR法)(HD201)

● CHO残留DNA检测试剂盒(探针qPCR法)(HD202)


磁珠法宿主残留DNA提取试剂盒

目录号:HD101  

适用于生物制品样本的前处理,可用于分离纯化高质量宿主细胞残留DNA,并可与其他宿主残留DNA检测试剂盒配合使用。

1. 操作灵活:可手工提取或搭配TGuide S32 Pro全自动核酸提取纯化仪使用

2. 通用性强:可满足高/低pH、高盐、高蛋白等复杂样品的核酸提取

3. 准确灵敏:回收率在70%-130%,可纯化富集低至fg级别的DNA

4. 快速高效:操作步骤简单,1h即可完成整个流程

优异的加标回收率表现

实验例1

图1.模拟样本的加标回收率


图2.模拟样本的提取结果


所有模拟样本计算得到的加标回收率均介于70%-130%之间,符合《中国药典》要求(50% - 150%)。


实验例2

图3. 3款宿主细胞DNA残留提取产品的实验结果对比

 

三款提取产品的加标回收率均满足《中国药典》的要求(50%-150%),HD101相比竞品,在2个标准品浓度下的加标回收率值更高,CV值更稳定。


探针qPCR法检测试剂盒

目录号:HD201, HD202



Vero残留

DNA检测试剂盒

目录号:HD201

👈点击图片查看详情


CHO残留

DNA检测试剂盒

目录号:HD202

点击图片查看详情👉


适用于通过qPCR方法检测各种生物制品(中间品、半成品和成品)中宿主细胞残留DNA的含量。

1. 检测线性范围广:Vero细胞最低检出限至1 fg,CHO细胞检出限至5 fg

2. 检测准确,重复性好:选用国家标准品,试剂批间、批内稳定

3. 专属性强:受其他物种干扰值低,无交叉反应

4. 耐用性强:DNA碎片化不影响检测结果;仪器通用性强

5. 操作简单快速:1h内即可完成qPCR验证

检测线性范围广

两款试剂的qPCR结果线性化良好,线性范围广,扩增效率接近100%。

图4. HD201和HD202对目标标准品的qPCR扩增曲线

超高特异性识别宿主细胞DNA

两款试剂检测目标宿主细胞DNA的qPCR扩增曲线重叠性高,反应体系专属性强,抗外源物种基因组片段干扰能力强。

图5. 外源基因组干扰下HD201和HD202的qPCR扩增曲线

DNA碎片化处理下检测结果依旧准确

两款试剂的qPCR扩增曲线和标准曲线同对照相比,重叠性都很好,定量检测结果不受影响。

图6. HD201和HD202对片段化Vero和CHO DNA的qPCR扩增曲线

低丰度核酸的高灵敏度检出能力

与同类竞品相比,HD201对于超低丰度Vero DNA的定量qPCR结果更准确,CV值更稳定。

图7. 2款检测产品对Vero DNA标准品定量检测的结果对比


与同类竞品相比,HD202对不同浓度CHO DNA样本的qPCR结果都表现出更加良好的稳定性和准确性。

图8. 3款宿主残留DNA检测产品对CHO DNA标准品定量检测的对比结果


后续TIANGEN还将陆续推出E.coil、人源细胞系等宿主细胞的检测产品,敬请期待。


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