特色方案｜食品中维生素B12的测定

食品中维生素B₁₂的测定

1. 提取

维生素B₁₂标准品：

380-04112-S，Vitamin B12

维生素B₁₂同位素内标：

380-04412-IS，[13C7]-Vitamin B12

准确称取混合均匀的样品2.0 g（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入20 mL去离子水溶液，涡旋10 min，

超声15 min。于8000 r/min下离心10 min，移取4 mL上清液，待净化。

2. 净化

SHIMSEN 维生素B₁₂免疫亲和柱，1000ng/3mL（货号：380-00930-03）

（1）活化：加压排出免疫亲和柱中的保护液，弃去流出液；

（2）上样：准确移取上清液4 mL加入免疫亲和柱中，弃去流出液；

（3）清洗：当上样液的液面下降到免疫亲和柱中的管体处时（未完全流干时），向柱中加入10 mL水，弃去流出液，于负压装置（货号：RT-26077）中将小柱抽干；

（4）洗脱：关闭负压装置阀门，向柱中加入2 mL甲醇，静置2-3 min，打开阀门，收集流出液。

（5）重新溶解：向洗脱液中加入50 µL 0.1%甲酸水，于50-60℃氮吹至近干；再加入1 mL 0.1%甲酸水涡旋混匀，过0.22 µm尼龙滤膜（货号：380-00321），待检测。

注意：

① 实验中应控制柱流速不要超过1 mL/min；

② 免疫亲和柱于2-8 ℃储存，不可冷冻，使用前需要恢复到室温。

附：参考方法

食品中维生素B₁₂的测定 参考标准GB 5009.285-2022 第二法