沃特世氨基酸新方案优化，实现不同平台间方法重现

2023-05-31 20:17:24, 沃特世 沃特世科技（上海）有限公司



2022年，沃特世发布了UHPLC氨基酸分析解决方案，至此，沃特世的氨基酸分析方法包可覆盖全部液相平台。

但是，在不同平台上重现方法的时候，一方面，不同型号仪器的驻留体积和系统扩散的不同会引起保留时间的差异；另一方面，沃特世提供的氨基酸方案中使用了Empower的梯度曲线功能，有些仪器平台，比如1260，没有梯度曲线的功能，会达不到分离度的要求，导致方法转移失败。




为此，为了更好地进行不同平台间的方法重现，沃特世总部对UHPLC氨基酸原有方案（17种水解氨基酸标准品）在1260仪器上做了优化。


1

 增加仪器1260的体积来消除驻留体积的影响

驻留体积会影响保留时间，系统扩散会影响峰宽、灵敏度和溶剂效应。在实际的测试中，Arc HPLC系统具有更高的驻留体积和系统扩散。方法迁移时，在四元系统上调整驻留体积，缩短了保留时间之间的差异，并提高了灵敏度，峰形也更好。


2

 增加梯度延迟体积和洗脱梯度，
减少梯度曲线的影响

在流动相梯度洗脱方法中，增加了0-2 min的梯度和13.09的洗脱梯度，通过增加延迟体积和洗脱梯度的方式，解决1260没有梯度曲线的问题，使氨基酸之间分离得更好，分离度更高。


优化方法后保留时间的比较：

1260 Infinity四元系统和Arc HPLC系统的保留时间一致，重复性范围均在0.0%至0.1%。


优化方法后峰面积重现性的比较：

1260 Infinity四元系统和Arc HPLC系统的各组分峰面积重复性范围均在0.0%至1.6%。


1260氨基酸仪器新方法

  • 仪器系统：配备G1316B TCC SL的1260 Infinity四元系统-带色谱柱预加热器

  • 检测器：TUV

  • 色谱柱：AccQ•Tag Ultra 2.5 μm，4.6×150 mm（货号186010407）

  • 流速：1.5 mL/min

  • 柱温：43 ℃

  • 检测波长：260 nm

  • 进样量：3 μL

  • 流动相A：AccQ•Tag Ultra Eluent A浓缩液（货号186003838）

  • 流动相B：90:10 水:AccQ•Tag Ultra洗脱液B（货号186003839）

  • 流动相C：水

  • 流动相D：AccQ•Tag Ultra洗脱液B（货号186003839）


注：



  • 细胞培养基及食品和饲料标准品未优化 — 这些需要进一步的方法调整

  • 建议与17种水解氨基酸同样的优化方式进行调整


  • 客服电话： 400-6699-117 转 1000
  • 京ICP备07018254号
  • 电信与信息服务业务经营许可证：京ICP证110310号
  • 京公网安备1101085018
  • 客服电话： 400-6699-117 转 1000
  • 京ICP备07018254号
  • 电信与信息服务业务经营许可证：京ICP证110310号
  • 京公网安备1101085018

Copyright ©2007-2023 ANTPEDIA, All Rights Reserved