特色方案｜顶空进样-气相色谱法定量测定酒类样品中痕量氰化物

白酒中的氰化物也与制作原料有关。上世纪五六十年代，以木薯为原料酿造的蒸馏酒检出氰化物的含量普遍较高，原因就是木薯中的氰苷含量很高。现在酿酒原料虽多为原粮（如：高粱、大麦、小麦等），但这些原粮或多或少还是含有一些植物氰苷，发酵过程中氰苷经过水解可产生氰化物进入酒体，通常以氢氰酸（HCN）形式赋存。

氰苷毒性主要通过HCN和醛酮化合物产生。氢氰酸属于剧毒类。急性氰化氢中毒的临床表现为患者呼出气中有明显苦杏仁味；轻度中毒主要表现为胸闷、心悸、心率加快、头痛、恶心、呕吐、视物模糊；重度中毒主要表现呈深昏迷状态，呼吸浅快，阵发性抽搐，甚至强直性痉挛。

因此，氰化物是酒类一项重要的检测指标，其限量是低于0.005 mg/L。现行食品中氰化物测定方法是国标 GB/T 5009.36-2016 中推荐的异烟酸-吡唑啉酮分光光度法定量，该方法在定性过程存在H2S或SO2假阳性干扰问题, 定量需样品蒸馏，操作繁琐费时。另外还有KCN 溶液作为标准溶液，与氯胺-T反应，将氰化物衍生为氯化氰，再用顶空气相色谱法测定粮食中氰化物含量的相关报道，方法使用了剧毒的KCN，大大增加了实验风险。

基于上述方法的缺点，本文采用低毒KSCN 代替KCN，与氯胺-T反应，将氰化物衍生为氯化氰。使用顶空进样结合带ECD检测器的GC定量，以此测定酒样中痕量的氰化物含量。此方法安全、准确、可靠，可用于酒样中氰化物含量的测定。

1.1 仪器及耗材

气相色谱仪：GC-2010 Plus

顶空进样器：HS-20

色谱柱：SH-Wax, 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm（P/N：221-75893-30）

顶空瓶：SHIMADZU-20ml顶空瓶（P/N：227-34155-01）

1.2 分析条件

顶空参数：

平衡时间：20 min

炉温：55 ℃

管线温度：80 ℃

GC参数:

色谱柱：SH-Wax, 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm

进样口温度：200 ℃

载气：N2

吹扫流量：3 mL/min

柱流量：1.02 mL/min

柱温程序：40 ℃ (1 min)_10 ℃/min_100 ℃(0 min)_ 30 ℃/min_200℃ (0.1 min)

检测器: ECD

检测器温度: 300 ℃

1.3 样品制备

溶液配制：精密称取 0.1673 g 硫氰酸钾(GR)，加水至100 mL，此溶液含SCN-1 mg/mL，再配制成浓度为0.01，0.05，0.10，0.20，0.40，0.80，1.00 μg/mL的KSCN系列溶液。另外分别配制10 g/L氯胺-T溶液、2 mol/L NaH2PO4溶液、50%乙醇溶液。

分析步骤：各吸取1.0 mL标准溶液置于20 mL 顶空瓶中，再加5 mL 50%乙醇溶液，加入0.4 mL 2 mol/LNaH2PO4溶液、0.1 mL 10 g/L氯胺-T溶液，加塞振摇1 min，进样1 mL气体分析测定。

样品分析 : 分别吸取 5 mL酒样、0.4 mL NaH2PO4溶液、0.1 mL氯胺-T溶液，加塞振摇 1 min，进样1mL气体分析测定。

2.1 色谱图与标准曲线

测定已配制的标准溶液系列，标样色谱图与标准曲线如下图所示。

2.2 检出限

根据0.05 μg/mL标准溶液数据，计算此方法检出限 ( 3倍信噪比) ，氰化物检出限见表 2。

2.3 重复性测试

利用 0.2 μg/mL浓度KSCN标准溶液制备样品，重复进样 5 针，结果见表2，结果表明重现性良好。

2.4 回收率测试

将氯化氰标准溶液添加到酒样品中，按照样品前处理方法制备，加标样品最终浓度为 0.2 μg/mL。不同样品回收率结果见表2

2.5 实际样品检测结果

按照样品前处理方法处理白酒、红酒、黄酒及蜂蜜酒等样品，检测结果如下表3 所示：

结论

采用顶空进样结合岛津GC-2010 Plus气相色谱仪对酒中氰化物进行分析，并利用KSCN代替剧毒物质KCN，方法操作简单、安全可靠，在0.05-1 μg/mL的范围内建立标准曲线，相关系数为0.995，平行5次测定峰面积的相对标准偏差为 5.4%，加标回收率为120%，可用于酒中氰化物的检测。