JMC：中国药科大、北京协和联合报道新型小分子 PD-L1 抑制剂，RTCA进行抗肿瘤药效研究

基于以上诸因素，急需一种更高效且应答率更高的PD-1/PD-L1治疗药物。来自中国药科大学和北京协和医学院的研究人员设计并合成了一系列含有联苯结构的抑制性小分子，并对其构效关系进行了评估。最终发现S4-1在蛋白、细胞和动物水平都展现出对PD-1/PD-L1相互作用的显著降低和T细胞活性的显著提高，从而发挥了抗肿瘤作用。

代表性小分子的生化效力与PD-L1蛋白的相互作用

那S4-1是如何影响PD-1/PD-L1相互作用的呢？这里提一下，BMS-202是百时美施贵宝公司研发的PD-L1小分子抑制剂，BMS-202作用到细胞表面，导致PD-L1二聚化，从而导致PD-1无法与其正常结合，阻断信号通路。

研究者将已知作用机制的BMS-202作为阳性参照，发现S4-1也会导致PD-L1蛋白形成二聚体，并被细胞内化进入到内质网中，随后在内质网中被降解。

然而S4-1单独处理肿瘤细胞并不会影响细胞的活力，研究者利用安捷伦实时细胞分析仪（RTCA）实时监测S4-1（10/20μM）单独对人黑色素瘤细胞的活力并没有影响，但当在效应细胞PBMC存在的情况下，100nM的S4-1较BMS-202也能对肿瘤细胞有很好的杀伤作用。表明S4-1是通过阻断PD-1/PD-L1信号从而激活免疫细胞对肿瘤细胞进行杀伤。

S4-1在体外阻断PD-1/PD-L1的相互作用，并在RTCA上进行了抗肿瘤药效研究

随后在体内药效研究中，S4-1在LLC和MC38两种人源化小鼠移植模型中都能广泛的抑制肿瘤的生长，其中高剂量组的肿瘤抑制率高达88%，并在两种模型中都有出现Tumor-free的结果。通过对Tils细胞进行分析发现，S4-1治疗的肿瘤中CD8+T细胞和M1型巨噬细胞等细胞的浸润增加，Treg和MDSC等免疫抑制性细胞比例减少，GranzymeB和IFN-γ细胞因子表达上调。而且所有指标在人源化LLC小鼠移植模型中均优于BMS-202。

S4-1在肺癌人源化LLC小鼠模型中的体内抗肿瘤作用

因此，小分子抑制剂S4-1通过阻断PD-1/PD-L1信号通路从而大大改善肿瘤微环境的免疫抑制，增强免疫系统的抗肿瘤活性。根据现有的研究结果后续S4-1也许将替代现有的PD-L1大分子抗体药，并大大提升广谱肿瘤治疗效果。

 Agilent xCELLigence RTCA技术是基于微金电极阵列的实时无标记生物传感技术，无需对细胞做任何标记，可对细胞进行全程自动检测，大幅缩减人员的操作步骤，且确保实验数据的客观准确和完整性。实时分析可以更准确地评估产品的生物学特性、疗效或效价，特别是可以在几个小时乃至数十天内实时连续检测细胞的动力学变化。实时细胞分析仪（RTCA）已在肿瘤免疫治疗中被广泛应用，特别是细胞疗法和抗体药的效力研究，但在本篇文章中RTCA也被应用于小分子抑制剂的药效研究，并提供了长时程持续的细胞活力监测数据，为小分子抑制剂的药物筛选以及药效研究提供了简便的方法。