SEC-MALS（尺寸排阻色谱与多角光散射联用）测定寡核苷酸分子量
2023-02-17 21:30:52 东曹（上海）生物科技有限公司
寡核苷酸疗法已在很多疾病适应症的临床治疗方面取得了快速进展。近几年，已有多种寡核苷酸药物，如短干扰RNA（siRNA）和反义寡核苷酸（ASO）药物获得了FDA上市批准，更有多种microRNA（miRNA）和适体作为治疗平台正在开发。
治疗性寡核苷酸是由固相化学合成工艺生产。尽管在寡核苷酸合成及最彻底的后合成清理工艺已经取得了不错的进展，但在链分布方面的异质性仍将存在，这种分布的监控是工艺及质量控制一个基础指标。对该指标的评估，通常是采用毛细管电泳或阴离子交换色谱法。
本篇应用介绍了超高效尺寸排阻色谱法在分辨长度相差一个碱基的不同寡核苷酸样品的能力。
TSKgel UP-SW2000是一款粒径2 μm、12.5 nm孔径的硅基SEC色谱柱，用于分离小蛋白、肽和寡核苷酸。该柱适用于UHPLC系统，也可用于HPLC系统，非常适合从传统HPLC尺寸排阻色谱法到UHPLC系统的方法转移。
图1是采用两根30 cm柱长的TSKgel UP-SW2000色谱柱串联，来分析两种相差一个碱基的寡核苷酸混合物。
图1 N及N-1寡核苷酸的分离
使用东曹多角度光散射检测仪LenS3™通过SEC-MALS法分析未纯化及纯化后的寡核苷酸样品。
图2 显示了未纯化和纯化后寡核苷酸样品的色谱对照图。图3显示了未纯化的20-mer 的分子量分布情况。分子量示迹线清楚地表明存在较高和较低分子量的杂质。
图2 未纯化及纯化20-mer的UV色谱对照图
图3 未纯化的20-mer的分子量分布（绿色）
利用图4 中的峰分析，可对产物和杂质进行分子量分析。纯化样品的MALS 分析结果（图5）证明了20-mer 寡核苷酸具有极高的纯度。
图4 未纯化的20-mer的峰分析
图5 纯化的20-mer的分子量分布（绿色）
TSKgel UP-SW2000是一款尺寸排阻色谱柱，设计用于对分子量为1～150 kDa的生物分子进行的UHPLC分析。其分离范围非常适合分析小蛋白质或多肽及其聚集体。
本应用表明，该色谱柱也可在UHPLC系统上用来分析寡核苷酸。配合使用多角度光散射检测还能获取更多有关寡核苷酸和样品杂质的分子量信息。
开工必读！TSKgel色谱柱清洗再生方法及注意事项
采用TSKgel G6000PWXL色谱柱测定葛仙米水溶性多糖含量
参考GB31613.1-2021测定牛可食性组织中氨丙啉残留量
使用SEC-MALS监测多糖的结构变化
药典应用｜参照2020版中国药典分析卡托普利
05-26
研究新范式创新篇 | 时空多组学研究策略05-25 质谱创新组学
【6.13-14青岛】青岛市分析测试学会系列学术报告会暨国际科学仪器及实验室装备展览会05-25 Pribolab
会议活动|全自动便携式测铊仪亮相2023年第29届科技周05-25
力高泰新品 ‖ 机载高精度N2O、CH4、CO2温室气体测量平台05-25 力高泰
【Esco Healthcare】放射性药物防护隔离器系统05-25
寻人召集令 | 先定一个小目标，比如加入我们！05-25
益世科生物邀您共赴2023 CIPM，亮点“剧透”来了！05-25
2023中国医院大会 | 创新平台技术推动医院高质量发展05-25
会议预告︱第七届中国动物健康与食品安全大会 勤邦与您相约成都05-25
南昌CACLP | 海狸将携单样本自动化处理系统，化学发光、NGS建库、细胞分选等高端磁珠产品亮相05-25 Marketing
重磅签约！张文宏，受聘西部一大学05-25
多所高校发布公务接待餐费标准：最高300元每人次05-25
北京，两所大学签约！05-25
又一所211大学，签约江苏盐城！05-25
曹雪涛团队，2023年第5篇！05-25
烟草研究院招聘公示引热议：3人毕业于清华北大，7人是博士05-25
宸安科普：染色后冻存3个月，流式质谱的样本依旧稳定！05-25 Gray
Bio-Rad 诚邀您参加 Droplet Digital PCR 2023 国际研讨会05-25
年度离谱 WB 结果大赏，你中了吗？05-25