赛默飞禽流感病毒qPCR检测解决方案助您防控禽流感疫情

2023-02-13 13:24:21, ABI 赛默飞世尔科技生命科学产品

2020年已有多起高致病性禽流感疫情发生

2020年2月1日，湖南省邵阳市双清区某养殖户饲养的肉鸡发生H5N1亚型高致病性禽流感疫情。养殖户存栏肉鸡7850只，发病死亡4500只。疫情发生后，当地已扑杀家禽17828只，全部病死和扑杀家禽均已无害化处理。

2020年1月21日，新疆生产建设兵团第八师玛管处大泉沟水库野生天鹅发生H5N6亚型高致病性禽流感疫情。该区域栖息天鹅150余羽，发病19羽，死亡19羽。这起疫情是2020年以来新疆发生的第4起H5N6亚型高致病性禽流感疫情。

年初世界范围内禽流感疫情呈高发趋势。据世界动物卫生组织（OIE）消息，2020年1月29日，丹麦确认发生一起H5N1型低致病性禽流感疫情，经实验室检测发现，有48000只禽类疑似病例；2019年12月31日至2020年1月4日，波兰发生8起H5N8亚型高致病性禽流感，截止1月31日，4394只家禽死亡，已扑杀86683只家禽；2020年1月17日，捷克确认发生H5N8高致病性禽流感疫情，此次疫情有15只禽类疑似受到感染，其中6只禽类发病死亡，杀死和处置9只；2020年1月19日，乌克兰确认发生一起H5型高致病性禽流感疫情，经实验室检测发现，此次疫情有98000只禽类疑似受到感染，其中4856只发病死亡。

赛默飞禽流感病毒qPCR检测解决方案

▲GenoTube拭子采样管

GenoTube拭子采样管，通过德国FLI（Friedrich-Loeffler-Institute）验证，推荐用于病原体样品采集。该采样工具能实现样品常温运输和保存，并对接实验室qPCR、ELISA、胶体金检测卡检测。提高样品运输过程中的生物安全、提高物流速度的同时降低物流成本。

MagMAX核酸提取试剂盒是美国农业部（USDA）禽流感国家检测标准中的推荐核酸提取方案。试剂盒采用磁珠法的原理，可以对接自动化提取方案，实现高通量提取。

▲MagMAX-96核酸提取试剂盒（小体积）

MagMAX-96核酸提取试剂盒（小体积）可从低至50 ul起始样本中高通量提取病原体RNA或DNA，比同类试剂盒所需样本量少90%，却能达到相等的灵敏度。

其核心优势在于：

➤ 与RNA和DNA的结合效率高于硅胶膜方法；

➤ 具有更高和更一致的核酸产量；

➤ 手动提取可以洗脱低至20 ul的核酸，自动提取可以洗脱低至25 ul的核酸，溶剂采用无核酸酶的水，由此可获得浓度更高的RNA和DNA。

▲MagMAX CORE核酸提取试剂盒

MagMAX CORE核酸提取试剂盒特别为病原体样品核酸提取而优化，能够从最广泛的病原体样品类型之中纯化核酸，覆盖当前市场上所有病原体样品制备试剂盒所涉及的应用。

其核心优势包括：

➤ 室温试剂，即取即用；

➤ 洗涤步骤更少，操作流程更加快速；

➤ 新的配方和工作流程，可支持下游的qPCR, CE, NGS等应用。

Applied Biosystems品牌的荧光定量PCR仪是qPCR领域的市场领导者，为您提供多个型号的选择，适合您不同的实验需求。其中7500型荧光定量PCR仪是美国农业部（USDA）禽流感国家检测标准中的推荐qPCR仪器方案。

▲7500 型荧光定量PCR仪

这款经典的仪器很多兽医检测的用户已经非常熟悉了，自从上市以来，一直受到用户的广泛好评。该仪器覆盖兽医检测常用通道：FAM™, VIC™, NED™, TAMRA™, ROX™, CY5等，不仅满足禽流感检测需求，还能够满足兽医其它疫病qPCR检测需求。

流感病毒根据其蛋白组成可分为A、B和C三型。禽流感病毒是一种A型流感病毒，其基因组由八个单链RNA片段组成。根据两个表面糖蛋白、红血球凝聚素（H）和神经氨酶（N）的表达不同可以对禽流感病毒进行进一步分类。从年初已经报道的病例中，我们看到，今年爆发的禽流感疫情在不同地区呈现不同亚型（H5N1、H5N6、H5N8等）。在16种特异性H亚型中，有两个亚型H5和H7对家禽具有较高的致病能力。在不同动物种属间，A型流感病毒的基质基因具有较高的保守性，因此可以用于检测全部A型流感病毒。从另一个角度来说，H5和H7亚型也是全世界监测的重点。由于H基因相对容易变异，我们建议先用通用型定量试剂筛查，而后对阳性样品分型。分型可以采用qPCR/CE/NGS的技术进行，这样的策略可以有效提高检出效率，有效避免漏检。

▲VetMAX-Gold 禽流感病毒qPCR检测试剂

VetMAX-Gold 禽流感病毒qPCR检测试剂是美国农业部批准的首个禽流感的PCR解决方案。它是一种筛查工具，可检测两个编码病毒基质的序列和一个编码核蛋白的序列，这些基因是所有AIV亚型的共同基因。该试剂可以检测到少至1-10个RNA分子，当病毒RNA分子数接近40个或更高时，检测结果非常稳定、可靠。

上图显示了VetMAX-Gold 禽流感病毒qPCR检测试剂的分析灵敏度。采用禽流感基质基因阳性对照核酸测试时，从2百万个分子稀释到10个分子，都能成功检测出。重复样品扩增曲线基本重叠，说明了检测试剂的高度稳定性。Ct值对RNA分子数作图所得斜率接近3.3（线性相关系数为0.994)，表明扩增效率接近100%。