如何为荧光定量PCR选择合适的TaqMan Assay？

TaqMan探针法是目前荧光定量PCR使用最广泛的方法之一，针对不同的应用需要设计不同的引物和 TaqMan探针。如果需要检测不同样本中基因的表达量，应该如何选择？如果需要研究某个 SNP位点的基因型，又要怎么做呢？不要着急，这些问题 TaqMan Assay都可以帮您解决。TaqMan Assay中包含了您实验所需要的引物和 TaqMan探针，引物探针的浓度和反应条件都已经优化好，开盖即用，为您节省了预实验的时间。那么如何根据不同的实验需求查找对应的 TaqMan Assay呢？本篇将以基因表达的 TaqMan Gene Expression Assay搜索为例，为大家详细介绍一下。

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首先，打开赛默飞世尔科技（以下简称：赛默飞）官网主页（www.thermofisher.com），鼠标放在“热门产品”标题上方，在弹出的下拉框中选择“TaqMan荧光定量PCR”的选项（图1）。

图1. 赛默飞官网首页

图2.1  Applied Biosystems TaqMan检测试剂盒初步搜索

这样，您就搜索出了针对此基因的表达，分型等各种检测类型的TaqMan试剂盒，可以根据具体的应用需求点击查看。

图2.2  Applied Biosystems TaqMan检测试剂盒初步搜索结果

如果您只需要查找某一种类型的 TaqMan检测试剂盒，可以按照 advanced search的流程进行查找。

1. 点击“TaqMan Assays”右侧的下拉三角；

2. 根据您的检测需求，选择不同的应用。如果需要检测样本中基因的表达量，可以选择“Gene Expression”，并在搜索栏中输入基因名称， GenBank编号等关键信息；检测SNP位点的基因型，选择“SNP Genotyping”，在搜索栏中输入 rs号等信息；

3. 点击“Search”按钮进行搜索；

图3.1 TaqMan Assay Advanced Search流程

搜索得到目的基因相关的所有TaqMan gene expression assay，这些assay在扩增子长度，检测位置，探针是否跨外显子等方面会有所不同，如果需要进一步的搜索，可以参考如下步骤（图3.2）。

4. 点击“Search”右侧的“Advanced Search”按钮；

5. 在弹出的第二栏选项中，点击“Format”按钮右侧的下拉三角，如果需要检测少数几个基因的表达，可以选择“Single-tube assays”。如果需要研究的基因比较多，希望选用提前包埋好TaqMan gene expression assay的96孔板或者微流体芯片，可以选择“Arrays”；

6. Assay Type选择“All Gene Expression Assays”，也可以根据具体需求选择非编码RNA（Noncoding RNA only），融合基因检测assay（Fusion）等；

7. 点击Species选择物种（如果为人/小鼠/大鼠之外的物种，点击 “Enter More Species”进行选择）；

8. 如果要同时查询多个基因，也可以点击“Enter multiple targets”进行批量搜索；

9. 如果需要根据目的基因序列进行搜索，可以点击“Enter target sequence”的按钮，在“Enter Single Sequence”下的对话框中输入序列；

10. 点击“Search”键，得到搜索结果。

图3.2 TaqMan Gene Expression Assay Advanced Search

点开“详细信息”（View Details）可以进一步查看RefSeq、检测区段、扩增子长度等信息，如果没有特殊要求，可以选择标注有“Best Coverage”的assay；

图4. TaqMan Gene Expression Assay搜索结果

如果您已经搜索到符合需求的基因表达assay，通过Assay ID和货号即可下单订购。除了TaqMan Gene Expression Assay之外，我们常用的TaqMan Assay还涵盖了SNP、CNV、microRNA和mutation检测等方面的应用，都可以通过类似的方法进行搜索。如果您在查询过程中有任何疑问，欢迎随时联系我们。

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