qPCR软件报错了？别慌，这篇文章会给你答案！

2023-02-06 10:36:20, TAS 江燕琼赛默飞世尔科技生命科学产品

在运行qPCR实验或分析数据时，有时候会遇到软件报错，小编在这里列举了Applied Biosystems^TM 品牌仪器软件的常见报错，分析了可能的原因和解决办法，如果您正在使用我们的仪器，希望本文能给您提供一些解决软件报错问题的思路。

一、通用报错(多款机型软件均可能出现)

1. 打开数据分析软件报错：java.lang.IIIegalArgumentException: One of the raw spectra is null。点击OK接受后，扩增曲线是空白(如图stepone plus软件)。

问题分析：

可能是单次数据异常，导致校正文件丢失。在软件上点击Analysis > override calibration > Use another calibration file 下选择同仪器相同类型实验文件做校正，重新分析后可以恢复正常数据。出现该报错的原因可能是双击了start run, 或者分析/保存数据过程被中断，例如分析/保存过程中关闭软件或拔出U盘。

2. 打开数据分析软件报错：Analysis cannot proceed: not enough sample definded（如图stepone plus软件，此报错仅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本软件）。

问题分析：

plate setup步骤未给样品孔设置sample信息，设置好sample信息后重新分析，数据可以恢复正常。

3. 打开数据分析软件报错：Analysis cannot proceed: not enough targets definded（如图stepone plus软件，此报错仅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本软件）。

问题分析：

plate setup步骤未给样品孔设置target信息，设置好target信息后重新分析，数据可以恢复正常。

4. 打开数据分析软件报错：Analysis failed due to: GExSession doesn''t exist in context。点击OK 接受后，扩增曲线是空白（如图stepone plus软件）。

问题分析：

扩增循环阶段未采集信号，需要打开信号收集标识。

5. 在多重反应程序设置中，给样品孔添加ROX作为reportor 的探针时，报错：Dye "ROX" already used in passive reference（如图Q5软件）。

问题分析：

仪器默认passive reference选择ROX作为参比荧光，如果实验中ROX是作为探针的报告基团，则需要将passive reference改成None，之后就可以在target设置中选择ROX作为探针了。

6. 打开数据分析软件报错：The selected file cannot be opened, cannot open the file because file contents are not recognized（如图Q5软件）。

问题分析：

可能的原因包括：

1. 通过导入文件(import plate setup)在实验中添加了重复的样本，使用了相同的sample name，建议编辑样品名称时不要使用相同的sample name 命名样品。

2. 实验名称包含不合要求的字符，例如空格，括号等，建议实验名称不要使用不符要求的字符。

3. 文件受损，数据不完整，建议仪器运行过程中不要操作软件。

4. 拷贝数据的U盘有故障，导致拷贝数据不完整，建议更换U盘重新拷贝数据。

二、7500报错

1. 运行程序时报错：1404 Hold duration too short for read。

问题分析：

数据采集时间太短，PCR循环阶段data collection step 时间设置不小于31秒，melt curve 阶段data collection step请勿修改。

2. 运行程序时报错：Java Platform SE Binary has stopped working，实验中断。

问题分析：

如果通过直接双击已保存的edt模板文件去运行实验程序，可能会出现报错。建议先打开7500软件，通过New Experiment > From Template导入edt文件进行实验。

3. 点击start run时报错"The instrument type for the experiment is not compatible with the connected instrument"。

问题分析：

实验中选择的仪器类型与实际使用的仪器不符，需要到Setup界面重新修改为正确的仪器类型。

4. 程序设置报黄色提醒 "number of data collection points is not valid"

问题分析：

运行程序设置了多个信号采集点，定量实验中只能设置一个信号采集点，可以设置在cycling stage 。

5. eds文件导入PTS软件，报错"cannot import any experiment file(s) because of the following error(s): "

问题分析：

使用7500 v2.4版本软件产生的数据与PTS软件不兼容，可以将eds数据先用7500 v2.3的软件打开，分析后保存，然后再导入PTS软件。

三、Q3/5报错

1. 数据打开后扩增曲线是空白，点击Analyze分析后报错：The analysis cannot proceed because the experiment is missing required plate setup information. Go to ''Define'' and ''Assign'' page to creat and assign targets and samples. 点击OK接受后，扩增曲线仍是空白。