特色方案｜化妆品中曲安西龙等63种激素原料测定

2022-12-27 09:30:12 岛津（上海）实验器材有限公司

化妆品检测特色方案

曲安西龙等63种激素原料测定

随着时代的发展，化妆品的使用也越来越日常化，保湿、美白、抗老、祛皱……一步也不能少。市面上的化妆品产品越来越多，某些产品看似好用，效果好，见效快，且短期使用看不出副作用。但用一段时间之后，开始出现红疹，长痘痘，水肿等等情况。这些状况往往是因为化妆品内含有超量激素。为了规范美妆市场保护消费者，国家药品监督管理局发布了诸项法规、检测方法和技术规范。

岛津（上海）实验器材有限公司（SGLC）参考《化妆品安全技术规范》（2015年版）、《化妆品安全技术规范》（2022年版征求意见稿）以及化妆品现行国标中检测方法，推出岛津特色《化妆品检测应用文集》，为您在化妆品日常检测中排忧解难。

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本期小编为大家介绍岛津特色方案《化妆品中 63 种激素测定》（LCMSMS-443）。

特色应用分享

本文建立了岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8045 测定化妆品中 63 种激素的分析方法。本方法使用高柱效的 Velox 色谱柱在 18 min 内完成 63 种激素的分离，包括同分异构体的色谱分离。该方法灵敏度高，63 种化合物的检出限（ASTM，S/N=3）在 0.002-0.62 μg/L 间；对不同浓度的面乳基质进行加标回收率的考察，其回收率在 70.4%-126.5% 之间，符合化妆品实际测试情况。该方法满足“国家药监局 2019 年第 66 号文件”附件 1 中对 63 种激素的检测分析要求。

实验部分

1.1 仪器

本实验使用 LCMS-8045 三重四极杆液质联用系统。具体配置为 LC-30AD 输液泵，DGU-20A5 在线脱气机，SIL-30AC 自动进样器，CTO-20AC 柱温箱，CBM-20A 系统控制器，LCMS-8045 三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。

1.2 分析条件

液相条件

色谱柱：

Shim-pack Velox C18 2.1 mm I.D.× 100 mm L., 2.7 μm

流动相：A 相 - 水；B 相 - 乙腈

流速：0.45 mL/min

柱温：40℃

进样体积：5 µL

洗脱方式：梯度洗脱，B 相初始浓度为 25%，时间程序见表 1。

质谱条件

离子化模式：ESI（+）

雾化气流速：3.0 L/min

加热气流速：10.0 L/min

干燥气流速：10.0 L/min

接口温度：300℃

加热模块温度：400℃

DL 温度：250℃

碰撞气：氩气

MRM 参数：见表 2

样品前处理

2.1 样品制备

参照“国家药监局 2019 年第 66 号文件”附件 1 中的激素分析方法。

称取样品 0.2 g（精确到 0.001 g），置于 10 mL 具塞塑料离心管中，加入 2 mL 乙腈，在涡旋混合仪上振荡 30s 至试样与提取溶剂混合均匀，然后再加入 8 mL 乙腈，超声提取 20 min，静置至室温，以 6000 r/min离心 10 min，去取上清液 3 mL 置于 10 mL 离心管，再用 6 mL 水稀释，然后经 0.22 μm 滤膜过滤至 1.5mL样品瓶，备用。

2.2 基质匹配曲线溶液的制备

选取空白乳液样本，经过 2.1 样品前处理制备出空白样品溶液，以此空白样本溶液做溶剂，配制不同浓度的校准曲线溶液，浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 、5.0、10.0、20.0、60.0 和 100.0 μg/L，用于建立基质匹配曲线。

结果与讨论

3.1 MRM 色谱图与同分异构体的分离

在 63 种激素（MRM 色谱图见图 1）中，有几组物质互为同分异构体，分离难度较大，特别是互为顺反异构的地塞米松和倍他米松（结构见图 2），以及存在 R 型和 S 型的两种差向异构体的布地奈德（Budesonide，简称 BUD，结构见图 4）。本方法选择高柱效的 Velox 色谱柱，将地塞米松和倍他米松（图 2）、布地奈德 R型和 S 型（见图 3）两种同分异构体实现液相分离。

3.2 标准曲线

按 1.2 分析条件测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立基质匹配校准曲线（部分化合物的校准曲线见图 4），63 种激素在相应线性浓度范围内，相关系数在 0.9952~0.9999 之间，各浓度点的回读准确度在 85.0%~112.7% 之间，线性相关性良好。63 种化合物的检出限（ASTM，S/N=3）在 0.002-0.62μg/L 间，满足标准 0.6 μg/L（部分化合物为 2 μg/L）要求，其线性方程、相关系数及仪器检出限见表 3。

3.3 精密度

用空白基质配制不同浓度的混合标准溶液依次进样，每个浓度平行测定 6 次，考察仪器的精密度。结果显示，63 种激素在各浓度下的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.02%~0.64% 和 0.40%~11.85% 之间，结果表明仪器测试的精密度高 ( 见表 4)。

3.4 基质加标实验

称取多份乳液样品各 0.2 g，分别添加 63 种激素标准溶液，参考 2.1 前处理，制备出浓度为 0.075 μg/g、0. 3μg/g、0. 75 μg/g 和 3.0 μg/g 的加标样品。每个浓度平行 3 个，计算 63 种激素在各浓度下的平均加标回收率（见表 5）。结果显示，不同基质加标浓度的回收率范围在 70.4%-126.5% 之间，相对标准偏差在 0.54%-8.98%。

结论

本文使用岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8045 建立测定化妆品中 63 种激素的分析方法。该方法中 63种激素的基质匹配曲线，其相关系数在 0.9952~0.9999 之间，各浓度点的回读准确度在 85.0%~112.7% 之间，线性相关性良好。63 种化合物的检出限（ASTM，S/N=3）在 0.002-0.62 μg/L 间，满足标准 0.6 μg/L（部分化合物为 2 μg/L）要求。稳定性考察中，63 种激素的保留时间相和峰面积的相对标准偏差分别在 0.02%~0.64%和 0.40%~11.85% 之间，仪器精密度良好。不同基质加标浓度的回收率范围在 70.4%-126.5% 之间，相对标准偏差在 0.54 %-8.98%，符合化妆品实际测试情况。该方法分析速度快，灵敏度高，可为化妆品质量监测等相关行业的从业人员参考使用。