2022-12-21 17:50:49, DIKMA
根据《食品安全法》规定,国家卫生健康委、市场监管总局联合印发2022年第3号公告,发布36项新食品安全国家标准和3项修改单。其中包括《食品安全国家标准 食品中维生素B12的测定》(GB 5009.285-2022),自2022年12月30日实施。
本标准代替GB 5413.14-2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定》。本标准与GB 5413.14-2010相比,主要变化如下:
——增加了第一法液相色谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品中维生素B12的测定;
——增加了第二法液相色谱 -质谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品、即食谷物、烘焙食品、果冻、饮料中维生素B12的测定;
——修改了原微生物法为第三法。
迪马科技参考标准开发了食品中维生素B12的测定方法,使用ProElut VB12 IAC免疫亲和柱净化,反相液相色谱柱分离;广泛适用于饮料、牛奶和奶粉等样品的提取,该方法具有快速、操作简单、准确性高等优点,可供相关客户进行参考。
维生素B12是一个家族,包括氰钴胺、甲钴胺、腺苷钴胺和羟钴胺(后3种是维生素B12活性的辅酶形式),被统称钴胺类。这四种药物的不同在于维生素B12结构中与钴相连的X位分别由氰基、甲基、脱氧腺苷、羟基所取代。由于氰钴胺较之维生素B12的性质稳定,所以在维生素B12提纯工艺中,通常会加入氰化钠,使天然的维生素B12与氰基结合,成为性质更为稳定的氰钴胺。我们俗称的维生素B12,是指氰钴胺,因此我们检测食品中的维生素B12只需检测氰钴胺。
称取5-10g试样(精确至0.01g),置于150mL具塞锥形瓶中,依次加入30mL 0.25mol/L乙酸钠缓冲液,0.05g淀粉酶,0.2g胃蛋白酶,2mL氰化钾(或氰化钠)溶液,充分混合。将样品溶液放入水浴恒温振荡器,在37℃,酶解30min (肉类样品酶解10~16h),酶解后转入100℃水浴中,保持30min,取出冷却至室温。将样品溶液转移至100mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。移取上述溶液40mL至50mL离心管中,在10000r/min下离心10min,取上清液用玻璃纤维滤纸过滤后备用。
注:对于以氰钴铵素为营养强化剂,且本底中不含有其他形式钴胺素的样品,在样品提取时可不使用氰化钾(或氰化钠)。
ProElut VB12 IAC* (Cat.#: 67123)
(1)上样:将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下,弃去免疫亲和柱内的缓冲液,移取适量样品提取液 (其中含维生素B12为10~500ng) 注入玻璃注射器中,将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以2mL/min(1-2滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱,直至液面下降到亲和柱管体(未完全流干)。
(2)淋洗:10.0mL水淋洗,控制流速为2-3mL/min(1-2滴/秒),弃去全部流出液,2~3mL空气通过免疫亲和柱抽干;
(3)洗脱:准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速控制为1~2mL/min(1滴/秒),收集全部洗脱液于玻璃试管中;
(4)定容:50℃下氮气浓缩吹干后,初始流动相定容至0.5mL,供HPLC或LC-MS分析。
* ProElut VB12 IAC维生素B12免疫亲和柱:采用柱状琼脂糖凝胶作为固相载体,琼脂糖凝胶与维生素B12抗体偶联形成免疫吸附剂,能够特异性的纯化样品中的维生素 B12。
分析条件
色谱柱:Diamonsil C18(2) 250x4.6mm,5μm (Cat.#: 99603)
流速:1.0mL/min
进样量:100μL
检测器:361nm
柱温:40℃
流动相:A:0.05%三氟乙酸 B:甲醇 梯度
注意事项
(1) ProElut VB12免疫亲和柱建议保存在2~8℃条件下,不能冷冻,保质期为18个月;
(2) ProElut VB12免疫亲和柱建议在室温(18~30℃)下使用;
(3) 样品净化过程中,样品过柱、淋洗、洗脱时,控制好流速,不能太快,否则会使检测结果偏低;
(4) ProElut VB12免疫亲和柱柱容量≤1000ng,当样品中维生素B12超过柱容量时,请适当减小上样体积;
(5) 本方法仅适用于食品中维生素 B12(氰钴胺)的检测,如需检测氰钴胺、甲钴胺、腺苷钴胺和羟钴胺总量,请参考其他方法进行样品前处理,然后再使用ProElut VB12免疫亲和柱进行净化。
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