2024-03-27 14:50:57, DIKMA
乳铁蛋白因具有抗菌,抗氧化,抗癌,促进肠道发育,促进铁吸收,以及调节免疫系统等功能,故在乳制品及相关食品生产中均有不同程度的添加。2024年2月8日,国家卫生健康委、市场监管总局联合印发2024年第1号公告,发布47项新食品安全国家标准和6项修改单。其中包含《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》。
迪马科技参考《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》,使用磷酸盐缓冲液提取试样中的牛乳铁蛋白,肝素免疫亲和柱ProElut® HP IAC富集净化,反相高效液相色谱柱Bio-Bond® C4 300Å色谱柱分离检测,回收率在85%-100%之间。
本方案适用食品中牛乳铁蛋白的测定。
(1) 磷酸盐缓冲液Ⅰ:称取 30.08g十二水合磷酸氢二钠,2.50g二水合磷酸二氢钠,加入800mL去离子水溶解,再加入20mL乳铁蛋白提取剂*,用纯水定容至1L,混匀。
(2) 磷酸盐缓冲液Ⅱ:称取15.04g十二水合磷酸氢二钠,1.25g二水合磷酸二氢钠,5.84g氯化钠,加适量水溶解,定容至1L,混匀。
(3) 洗脱溶液:称取7.1g十二水合磷酸氢二钠,58.4g氯化钠,用适量水溶解,并定容至1L。
*乳铁蛋白提取剂随货(肝素免疫亲和柱ProElut® HP IAC)附赠,可有效增加提取效率和净化效率。
称取5g样品到50mL离心管中,加入25mL磷酸盐缓冲液Ⅰ,漩涡振荡5min,然后在4℃,10000r/min条件下离心15min,去除上层奶脂用大量程移液器取出中间层10mL作为上样液待净化。
ProElut® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)
(1)活化:将10mL注射器连接于亲和柱上端,放掉柱管保护液,取5mL磷酸盐缓冲液Ⅱ活化亲和柱;
(2)上样:取提取样液10mL过柱净化(控制流速1-3mL/min),弃去流出液;
(3)淋洗:溶液全部过柱后,加入10mL磷酸盐缓冲溶液Ⅱ淋洗,甩干柱内水分;
(4)洗脱:加入4mL洗脱溶液进行洗脱并收集,洗脱液混匀过0.22μm水系滤膜,待液相色谱检测。
色谱柱:Bio-Bond® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)
流速:1.0mL/min
进样量:50μL
柱温:30℃
检测器:PDA 280nm
流动相:A:乙腈 B:0.1%三氟乙酸水溶液
梯度设置:
(1) 肝素钠亲和柱随货附赠了乳铁蛋白提取剂,有效增加了提取效率和净化效率。
(2) 液体牛奶样品在50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg添加浓度水平上的回收率均大于85%,回收验证合格。
迪马科技
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