SN/T 2229-2008 茶叶中稻瘟灵测定操作要点及优化

称取试样5g，加入5g无水硫酸钠和20mL乙腈，涡旋混匀2min。超声提取10min，8000 rpm离心5min，将上清液通过通过装有无水硫酸钠的滤纸过滤脱水于100mL浓缩瓶中。再用20mL乙腈重复提取一次，合并提取液于100mL浓缩瓶中，在旋转蒸发器上45℃浓缩至干，加入6mL正己烷溶解残渣待净化。

试样称取2g，加入4mL饱和氯化钠溶液，涡旋混匀0.5min。放置0.5h，加入20mL乙腈，用均质器以10000r/min均质2min，4000rpm离心5min，将上清液转移至100mL浓缩瓶中。再用20mL乙腈重复提取一次，合并提取液于100mL浓缩瓶中，在旋转蒸发器上55℃浓缩约5mL，浓缩提取液转移至250mL分液漏斗中，加入100mL硫酸钠溶液和40mL正己烷，振摇2min，静置分层，将上清液通过将上清液通过装有无水硫酸钠的滤纸过滤脱水于200mL浓缩瓶中。再用40mL正己烷重复提取一次，合并提取液于200mL浓缩瓶中，45℃旋转浓缩至干，加入5mL正己烷溶解残渣待净化。

在实际茶叶样品的操作中，标准中采用了乙腈提取，再将提取液转移至分液漏斗中，加入硫酸钠溶液和正己烷进行液液萃取，溶剂置换为正己烷后进行旋蒸浓缩，然后再进行过柱净化，但我们按标准的操作步骤实际进行操作发现，回收率只有60%，我们进行了减少称样量、增加正己烷体积等操作，发现均不能得到很好的实验结果。因此我们采用去掉正己烷萃取这一操作，只用乙腈进行提取，同时将无水硫酸钠代替饱和氯化钠溶液，以达到更好的除水效果，按此方案得到的回收率为103%。

标准中采用石墨炭黑柱与弗罗里硅土柱串联净化后，再用HLB固相萃取柱进行净化，具体操作如下：

SPE柱：石墨炭黑柱，1000mg/6mL；弗罗里硅土柱，1000mg/6mL。

活化：3mL丙酮、5mL正己烷；

上样：待净化液全部上样，弃去流出液；

洗脱：石墨炭黑柱与弗罗里硅土柱串联后，加入10mL正己烷-丙酮（8:2）洗脱，收集流出液，洗脱液经60℃氮吹仪吹干，用6mL 30%甲醇溶液溶解残渣转移到HLB固相萃取柱中；

活化：3mL甲醇、3mL水；

上样：待净化液全部上样，弃去流出液；

洗脱：加入14mL 80%甲醇溶液洗脱，收集流出液。

洗脱液经60℃氮吹至约3mL后，加入5mL正己烷和5mL硫酸钠水溶液，涡旋混匀，3000r/min离心3min，取上清液上机测定。

但在实际进行操作中，我们采用Carb、Florisil PR、BRP固相萃取柱进行净化操作时，发现回收率只有70%左右，而去掉BRP固相萃取柱后，回收率为105%，且上机测定发现用Carb、Florisil PR柱已经可以达到净化效果，因此在我们的实验方案中去掉了BRP固相萃取柱。

SPE柱：Welchrom^® Carb，规格：1000mg/6mL；Welchrom^® Florisil PR，规格：1000mg/6mL。

活化：3mL丙酮，5mL正己烷，弃去；

上样：待净化液全部上样，控制流速在1mL/min~2mL/min，弃去流出液；

洗脱：石墨炭黑柱柱与弗罗里硅土柱串接，加入10mL正己烷-丙酮（8:2）溶液洗脱，控制流速在1mL/min~2mL/min，收集流出液于15mL离心管中；

复溶：60℃氮吹至干，准确加入1mL正己烷溶解残渣，过0.22μm有机系滤膜后上GC检测。

色谱柱：WM-1701，30m×0.32mm×0.25μm。

升温程序：150℃（4min），30℃/min上升至260℃（5min），20℃/min升至270℃（10min）；

进样口：260℃，分流进样，分流比：20:1；

检测器：350℃；

进样量：1μL；

载气流量：1.0mL/min。

表1.加标回收率表

如果您想了解更多内容，欢迎联系月旭科技销售人员或拨打400-810-6969服务热线，我们将竭诚为您服务。