2022-10-15 04:18:41, 锘海生命科学 锘海生物科学仪器(上海)股份有限公司
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一. SHIELD固定
制备样本,以下操作都注意遮光,可用锡箔纸包裹
2. 4°C下振荡孵育。(小鼠脑20mL孵育3天,大鼠脑50mL孵育6天)
3. 将SHIEID ON Buffer预热至 37°C振荡孵育24h(小鼠脑20mL,大鼠脑40mL),
二. Smart Batch+进行脱脂
1. “Delipidation Buffer(脱脂缓冲液)” 45°C” 24 小时(小鼠脑20mL,大鼠脑40mL).
2. 一整瓶“Conduction Buffer”倒入样本仓。35mL “Delipidation Buffer” 加入样本杯。
3. 样本上机
4. 打开“Auxiliary Power(辅助电源)”,
5. 打开“Electrophoresis Power(电泳电源)”。
6. 按“Preset(预设)”直到显示“Clearing Mode(透明化模式)”。
7. 每 2-3 天更新“Delipidation Buffer(脱脂缓冲液)”。
8. 完全脱脂后,样本下机 ,PBS洗(将样本放在打光的底透台上,没有实心则透明化完成)
9. 清洗仪器
10.(不染色的话50% EasyIndex 24h,37°C ;100% EasyIndex 24h,37°C包胶成像)染色则不进行此步骤
三.Smart Batch+进行免疫标记
实验:Day0 预孵育:
室温“Primary Sample Buffer过夜。
实验:Day1 一抗标记:
1. 样本上机。
2. 一整瓶“Primary Device Buffer”倒入样本仓。
“Primary Sample Buffer” 倒入样本杯,
3. 按照要求添加抗体、血清。
4. 将“Timer(定时器)”设为 18 小时。
5. 打开“Auxiliary Power(辅助电源)、“Electrophoresis Power(电泳电源)”和“Timed Shutdown(定时关机)”。
6. 按“Preset(预设)”,直到它显示“Labeling 1 (一抗标记)”
实验:Day2一抗洗涤和固定:
1. PH<8,下机(不小于8则延长下机时间)
2. PBS洗8h,每两个小时更换一次PBS。
3. 4%PFA室温振荡过夜
实验:Day3 PFA洗涤及二抗顺序标记
1. 被动洗涤6-8h,中间更换一次溶液,37°C
2. 按照要求添加二抗,Time设定为12h 。
3. 打开“Auxiliary Power(辅助电源),“Electrophoresis Power(电泳电源)”,打开“Timed Shutdown(定时关机)”,“Preset(预设)”,直到它显示“Labeling 2。
实验:Day4 二抗洗涤及PFA固定
二抗洗涤
1.“Secondary Sample Buffer(SS#缓冲液)”装满样本杯
2. 将“Timer(定时器)”更改为 6 h,中间更换一次溶液。
3. 打开“Auxiliary Power(辅助电源),“Electrophoresis Power(电泳电源)”,打开“Timed Shutdown(定时关机)”。
4. 清洗设备,将样本放入PBS中室温振荡
PFA固定
1. PBS洗。4% PFA固定二抗 室温振荡过夜。
2. PBS 洗,更换一次溶液。
3. 您已经完成染色了!现在可以准备开始进行 折射率匹配 。
四.折射率匹配实现样本光学透明
本实验方案需要使用 RI = 1.52 版本的 EasyIndex 。
1. 使用前最好将EasyIndex 过滤,消除里面的杂质。
2. 50% EasyIndex + 50% 蒸馏水中, 室温或37°C 下振荡孵育,过夜
3. 100% EasyIndex, 室温或37°C 下振荡孵育,过夜。
如果始终无法透明,则没有完全脱脂,只需将 EasyIndex 清洗掉并进一步透明化即可。
五.包胶
六.LS18 Plus快速高分辨光片显微成像
七. 专业的三维图像处理及分析
SmartBatch+ 主动式组织透明化及染色一体机主要是在SHIELD固定后的脱脂和染色的步骤中应用,脱脂和染色极其重要,因此我们要严格按照步骤,小心操作。按照步骤中的要求,掌握好相应的试剂,温度以及时间,其中SmartBatch+简单快捷的操作,大大减少了使用者的工作量。
SmartBatch+不仅操作方便,而且容量大,可以12个小脑一起上机,适合批量处理,效果明显优于不上机处理的样本。可以自动定时关闭,不用严格按照时间进出实验室,使用者可以更加便捷的开展实验。
日期 | 时间 | 步骤 |
星期五 | 上午9:00 | SHIELD-Off |
星期一 | 上午9:00 | SHIELD-On |
星期二 | 上午9:00 | 脱脂液(Delipidation Buffer)孵育 |
星期三 | 上午9:00 | 在SmartBatch+中进行透明化 |
星期四 | 上午9:00 | PBSN洗涤 |
星期五 | 下午5:00 | 一抗缓冲液孵浴(Primary Sample buffer)孵育 |
星期一 | 上午9:00 | 更换一抗缓冲液孵育(Primary Sample buffer) |
下午3:00 | 开始一抗染色 | |
星期二 | 上午9:00 | 检查PH值(继续电泳或者PBSN洗涤) |
下午1:00 | 更换PBSN | |
下午5:00 | PFA固定 | |
星期三 | 上午9:00 | 用二抗缓冲液洗涤 |
下午1:00 | 更换二抗缓冲液 | |
下午5:00 | 二抗 | |
星期四 | 上午9:00 | 二抗染色后洗涤 |
上午11:00 | 更换缓冲液,继续洗涤 | |
下午1:00 | PBSN洗涤 |
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