测定饲料中单宁的方案（分光光度法）

用丙酮溶液提取饲料中单宁类化合物,经过滤后,取滤液加钨酸钠-磷钼酸混合溶液和碳酸钠溶液，显色后,以试剂为空白对照,用分光光度计于760 nm波长处测定吸光度值,用单宁酸作标准曲线测定饲料中单宁含量。

试液的制备

称取试样1 g~2 g(精确至0.000 1 g),置于250 mL具塞三角瓶中,精密加入丙酮溶液50.00 mL,加塞密封,置振荡仪上振摇40 min,静置,用中速定量滤纸过滤,弃去初滤液,续滤液供测定用。

测定

标准曲线的绘制

精密量取单宁酸标准使用液0.00 mL,0.50 mL,1.00 mL,2.00 mL,3.00 mL,4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL,分别置盛有约30 mL水的50 mL容量瓶中,摇匀;加钨酸钠-磷钼酸混合溶液2.5 mL,加碳酸钠溶液5.0 mL,摇匀;分别用水定容至50 mL,播匀。单宁酸标准溶液浓度分别为0.00 mg/L,0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L,3.00 mg/L、4.00 mg/L,5.00 mg/L和6.00 mg/L,放置30 min显色后,以标准曲线0.00 mg/L为空白,在760 nm波长处测定标准溶液的吸光度,以单宁酸浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。

试样的测定

精密量取试液1.00 mL,置盛有约30 mL水的50 mL容量瓶中,摇匀;加钨酸钠-磷钼酸混合溶液2.5 mL,加碳酸钠溶液5.0 mL,摇匀;用水定容至50 mL,摇匀。放置30 min显色后，以标准曲线0.00 mg/L为空白,在760 nm波长处测定试样溶液的吸光度,根据标准曲线求出试液中单宁酸的浓度。如果吸光度值超过6.00 mg/L单宁酸的吸光度时,将试液稀释后重新测定。

试样中单宁(以单宁酸计)的含量X,以质量分数表示,单位为毫克每千克(mg/kg),按式计算。

式中:

c——试样测定液中单宁酸的浓度,单位为毫克每升(mg/L);

v——试样定容体积,单位毫升(mL);

D——试样稀释倍数;

m——试样质量,单位为克(g)。

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