【应用分享】中药莪术的33种农残测定分析

2022-09-13 17:21:37, 纳谱分析


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莪 术(图片源于网络,侵删)

莪术为姜科植物蓬莪术、广西莪术、温郁金的干燥根茎,含有大量挥发油和色素类成分,这些成分极易造成GC-MS/MS分析中六六六类目标物和特丁硫磷干扰大、对硫磷类目标物丢峰,同时也会造成LC-MS/MS分析中地虫硫磷和甲拌磷砜丢峰、3-羟基克百威响应变低等问题,导致分析结果不准确。纳谱分析推出的HLB-C中药农残专用柱,特别适用于重色素和重油脂的中药材农残测定。

今天,我们来看看莪术项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法 中的固相萃取法二,适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。

实验步骤

 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL,置20 mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。

二 / 供试品溶液的制备(直接提取法)

提取:精密称取5 g样品(3号筛),加氯化钠1 g,加入50 mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50 mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5 mL左右,加乙腈定容至10 mL,摇匀,置冰箱冷藏2小时,取出离心1分钟,取上清液至新的离心管内,放置至室温待净化。

三 / 净化


GC-MS/MS样品净化:

SPE柱:SelectCore HLB-C中药农残专用柱 500mg/6mL

净化:取SelectCore HLB-C固相萃取柱,加乙腈5 mL活化,再取莪术提取液2 mL置已活化的SelectCore HLB-C固相萃取柱中,收集样品液,待所有样品液进入柱体填料后,取5 mL乙腈洗脱,合并样品液与洗脱液,置40 ℃水浴氮吹至2 mL即得。

GC-MS/MS测定:

基质加标配制:精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL,氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

样品溶液配制:精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。


LC-MS/MS样品净化:

SPE柱:SelectCore HLB固相萃取柱500mg/6mL

净化:量取上述莪术提取液4 mL,过SelectCore HLB固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得。

LC-MS/MS测定:

基质加标配制:精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

样品溶液配制:精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX)

4.1  色谱条件

色谱柱:NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm;

进样口温度:250 ℃

升温程序:

                初始温度为60 ℃,保持1 min;       

                以10 ℃/min升温至160 ℃;

                再以2 ℃/min升温至230 ℃; 

                最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min;

载气:     高纯氦气(纯度>99.999%);

进样方式:不分流进样;

恒压模式:146 kPa;

进样量:   1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式:电子轰击电离源(EI);

电离能量:70 Ev;

接口温度:250 ℃;

离子源温度:250 ℃;

监测方式:多反应监测模式(MRM);

溶剂延迟:10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045)

5.1  色谱条件

色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm,  2.1×100mm;

流动相:

        A:0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)

        B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95:5

流速:0.3 mL/min

柱温:40 ℃

进样量:2 µL

梯度:

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30


5.2  质谱条件

离子源: 电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描

监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)

离子源接口电压:4.5 kV

雾化气:氮气3.0 L/min

加热气:干燥空气10.0 L/min

DL温度:250 ℃

加热模块温度:400 ℃

接口温度:300 ℃

干燥气:N2 10 L/min

六 / 注意事项

GC-MS/MS:

久效磷参考LC-MS/MS分析结果;内吸磷参考LC-MS/MS分析结果;特丁硫磷参考LC-MS/MS分析结果;采集条件参考下表;甲拌磷参考LC-MS/MS分析结果。 

LC-MS/MS:

地虫硫磷参考GC-MS/MS分析结果;采集条件参考下表;水胺硫磷参考GC-MS/MS分析结果;如遇个别目标物回收率低于60%可将上柱净化量增加到5 mL。

七 / 实验结果

莪术基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

莪术基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

表1  莪术中33种农药残留的测定添加回收结果(%)


八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出,莪术使用SelectCore HLB-C 500mg/6mL中药农残专用柱处理对其色素类成分、挥发油吸附良好,有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响;使用SelectCore HLB 500mg/6mL固相萃取柱处理的莪术LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好,搭配上述解决办法有效地解决了莪术中农残分析中存在的问题,提高了实验效率,为莪术的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

中药农残相关实验耗材:

方法类别

推荐产品

货号

适用品种

快速样品

处理法

(QuEC-hERS)


SelectCore QuEChERS 萃取盐包

6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg

QS-002

川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类

SelectCore QuEChERS 净化管

15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg

Q-15PCSG01

注意事项:

前处理步骤较多,提取效率较为充分,溶液颜色较深,基质标每次只能一个点,加入盐包时会放热,注意冰浴降温

对杀虫脒有吸附,回收率可能偏低

SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg

Q-15A06

木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类

注意事项:

改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质

SelectCore QuEChERS 净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg

Q-15A07

丹参专用

注意事项:

改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性

固相萃取方法1


SelectCore QuEChERS 净化管

15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg

Q-15PC04

基质简单,色素较少如:人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉

注意事项:

适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品,对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强

固相萃取方法2


SelectCore HLB固相萃取柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLB060-060200-1

紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类

注意事项:

吸附色素能力相比固相1要好,对滴滴滴类化合物吸附力较强故GC-MS/MS样品分析不适用,多用于LC-MS/MS样品净化

SelectCore HLB-A中药农残专用柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLBA60-060200-1

千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目

注意事项:

对磺隆类化合物吸附力强,且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用,故LC-MS/MS样品分析不适用,GC-MS/MS样品分析需5mL样品上柱净化

SelectCore HLB-B中药农残专用柱

200mg/6mL; 30/pkg

HLBB60-060200-1

色素较多,挥发油较多如:火麻仁、菟丝子、厚朴酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮s、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归

注意事项:

对滴滴滴类化合物具有一定吸附性,适用于LC-MS/MS样品分析,3mL样品上柱净化

SelectCore HLB-C中药农残专用柱

500mg/6mL; 30/pkg

HLBC60-060500-1

血竭、补骨脂、吴茱萸、花椒、姜黄、莪术、红花、连翘、青蒿、辛夷、香附、沉香、降香、檀香等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目

适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药,GC-MS/MS样品分析需2mL样品上柱净化

固相萃取方法3


SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱

500mg/500mg/6mL; 30/pkg

GN100-061000-2

色素含量多,含少量挥发油如:金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶

注意事项:

洗脱液中有甲苯,毒性较大,且洗脱时间较长;

对磺隆类农药有一定吸附LC-MS/MS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据

SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱

500mg/500mg/6mL; 30/pkg

GNA100-061000-1

紫草黄连、黄柏何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等

注意事项:

适用于干扰较为严重的GC-MS/MS样品分析。若用于LC-MS/MS样品分析,应联合其他净化方式

液相色谱柱


ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm

货号:

S013-026018-02110S

气相色谱柱


NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm

货号:

G5025-3002

花椒

青皮


木香

甘草


小茴香

灵芝


紫苏叶

厚朴


黄连、黄柏

补骨脂


吴茱萸

丹参


蛇床子

羌活


紫草

何首乌


血竭

金银花


石菖蒲

菊花

 

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