2022-09-05 16:02:00, 纳谱分析
中药大黄
大黄为蓼科植物掌叶大黄,唐古特大黄、药用大黄的干燥根和根茎,含有大量的蒽醌类成分,这些成分极易污染GC-MS/MS柱前端,造成目标物拖尾、丢峰、回收率不达标等问题,且常规净化小柱无法有效地去除这些蒽醌类成分。纳谱分析推出的GCB/NH2-A产品,适用于黄连、黄柏、大黄的气质质前处理分析。
今天,我们一起来看看大黄项目的前处理效果吧。
适用范围
本方法参考中国药典2020版2341第五法中的 固相萃取法二 和 固相萃取法三,适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。
实验步骤
一 / 对照品溶液的制备
1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1 mL,置20 mL量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,备用;
1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量,精密称定,加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液,即得。精密量取适量,加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品,同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份),置氮吹仪上,40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL,分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL,加乙腈稀释至1 mL,涡旋混匀,即得。
二 / 供试品溶液的制备
2.1 提取(直接提取法)
精密称取5 g样品(3号筛),加氯化钠1 g,加入50 mL乙腈,匀浆处理2分钟,离心后分取上清液,残渣再加50 mL乙腈,匀浆处理1分钟,离心后,合并两次提取上清液,减压浓缩至3~5 mL,加乙腈定容至10 mL,摇匀,待净化。
三 / 净化
3.1 GC-MS/MS 样品
SPE柱:SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL
净化:取SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱,用乙腈:甲苯(3:1)10 mL活化,量取上述大黄提取液2 mL,置已活化的SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱中,用乙腈:甲苯(3:1)20 mL洗脱,收集全部样品液与洗脱液,40 ℃水浴减压回收至2 mL,即得。
测定:
基质加标配制:精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL,氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
样品溶液配制:精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
3.2 LC-MS/MS 样品
SPE柱:SelectCore HLB 固相萃取柱 200mg/6mL
净化:量取上述大黄提取液3 mL,过SelectCore HLB 固相萃取柱,收集全部净化液,混匀,即得。
测定:
基质加标配制:精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液,乙腈定容至1 mL,再加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
样品溶液配制:精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水,混匀,过0.22 μm尼龙针式过滤器,上机分析。
四 / 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS-TQ8040 NX)
4.1 色谱条件
气相色谱柱:NanoChrom BP-50+MS,30m×0.25mm×0.25μm;
进样口温度:250 ℃;
升温程序:初始温度为60 ℃,保持1 min;
以10 ℃/min升温至160 ℃;
以2 ℃/min升温至230 ℃;
以15 ℃/min升温至300 ℃,保持6 min;
载气:高纯氦气(纯度>99.999%);
进样方式:不分流进样;
恒压模式:146 kPa;
进样量:1 μL
4.2 质谱条件
电离方式:电子轰击电离源(EI);
电离能量:70 Ev;
接口温度:250 ℃;
离子源温度:250 ℃;
监测方式:多反应检测模式(MRM);
溶剂延迟:10.0 min
五 / 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045)
5.1 色谱条件
液相色谱柱:ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm;
流动相:A: 0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵);
B: 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵)=95:5;
流速:0.3 mL/min;
柱温:40 ℃;
进样量:2 µL;
梯度:
时间
(min)
流速
(mL/min)
流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70301
0.3
703012
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
703016
0.3
7030
5.2 质谱条件
离子源:电喷雾离子源(Electrospray ionization,ESI)正离子扫描
监测方式:多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)
离子源接口电压:4.5 kV
雾化气:氮气3.0 L/min
加热气:干燥空气10.0 L/min
DL温度:250 ℃
加热模块温度:400 ℃
接口温度:300 ℃
干燥气:N2 10 L/min
六 / 实验结果
GC-MS/MS:由于SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱对久效磷有一定吸附容易导致其回收率偏低,故久效磷参考LC-MS/MS分析结果。
七 / 实验结果
大黄基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图
固相萃取法3处理大黄基质LOQ浓度点加标谱图(GC-MS/MS方法)
大黄基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图
固相萃取法2处理大黄基质LOQ浓度点加标谱图(LC-MS/MS方法)
表1 大黄中33种农药残留的测定添加回收结果(%)
八 / 实验结论
通过以上实验数据可以看出,大黄使用SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱处理对其色素类和蒽醌类成分吸附良好,有效地减轻了样品中蒽醌类成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响;使用SelectCore HLB 固相萃取柱处理的大黄LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好,搭配上述解决办法有效地解决了大黄农残检测中存在的问题,提高了实验效率,为大黄的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。
中药农残相关实验耗材:
方法类别
推荐产品
货号
适用品种
快速样品
处理法
(QuEC-hERS)
SelectCore QuEChERS 萃取盐包
6g MgSO4, 1.5g NaOAc; 50/pkg
QS-002
川桐皮、川赤芍、木通、通草、灯心草、白芍、麦冬、泽泻、益智、姜黄、枸杞、大枣等含碳水化合物和少量色素类
SelectCore QuEChERS 净化管
15mL, 900mg MgSO4, 300mg PSA, 300mg C18, 300mg Silica, 90mg GCB; 50/pkg
Q-15PCSG01
注意事项:
前处理步骤较多,提取效率较为充分,溶液颜色较深,基质标每次只能一个点,加入盐包时会放热,注意冰浴降温
对杀虫脒有吸附,回收率可能偏低
SelectCore QuEChERS 净化管 15mL, Pesticide Residue A06(含色素挥发油中药农残Q法); 50/pkg
Q-15A06
木香、厚朴、羌活等含挥发油和色素类
注意事项:
改良后的配方可以吸附更多的色素和挥发油基质
SelectCore QuEChERS 净化管15mL, Pesticide Residue A07(丹参中药农残Q法); 50/pkg
Q-15A07
丹参专用
注意事项:
改良后的配方提高了丹参农残测定的稳定性和重现性
固相萃取方法1
SelectCore QuEChERS 净化管
15mL, 1200mg MgSO4, 300mg PSA, 100mg C18; 50/pkg
Q-15PC04
基质简单,色素较少如:人参、西洋参、茯苓、白芍、山药、隔山撬、浙贝母、麦冬、葛根、粉葛、川赤芍、赤芍、白附片、川木通、桑白皮、三七、黄芪、甘草、天花粉
注意事项:
适用于含有较多有机酸和糖干扰的样品,对磺隆类和杀虫脒化合物吸附较强
固相萃取方法2
SelectCore HLB固相萃取柱
200mg/6mL; 30/pkg
HLB060-060200-1
紫草、北柴胡、陈皮、山楂、大黄、柴胡、当归、党参、地黄、防风、黄芪、桔梗、苦参、益母草、黄精、灵芝、茯苓、大青叶、板蓝根、甘草等含少量色素类
注意事项:
吸附色素能力相比固相1要好,对滴滴滴类化合物吸附力较强故GC-MS/MS样品分析不适用,多用于LC-MS/MS样品净化
SelectCore HLB-A中药农残专用柱
200mg/6mL; 30/pkg
HLBA60-060200-1
千年健、桃仁、苦杏仁、花椒、没药、紫苏叶、厚朴、金银花、艾叶、款冬花、乌梅、桑叶、牛蒡子、菟丝子、酸枣仁、莪术、槟榔、小茴香、枳实、郁金、白头翁、菊花、陈皮、白花蛇舌草、褚实子、化橘红、川防风、当归等富含挥发油和色素类气质质测定项目
注意事项:
对磺隆类化合物吸附力强,且对三氯杀螨醇类、滴滴滴类化合物具有一定吸附作用,故LC-MS/MS样品分析不适用,GC-MS/MS样品分析需5mL样品上柱净化
SelectCore HLB-B中药农残专用柱
200mg/6mL; 30/pkg
HLBB60-060200-1
色素较多,挥发油较多如:火麻仁、菟丝子、厚朴、酸枣仁、羌活、川芎、莪术、蛇床子、紫苏叶、姜黄、干姜、陈皮、枳实、青皮s、防风、莱菔子、槟榔、当归、小茴香、豆蔻、黄连、黄柏、虎杖、大黄、马钱子、化橘红、当归
注意事项:
对滴滴滴类化合物具有一定吸附性,适用于LC-MS/MS样品分析,3mL样品上柱净化
SelectCore HLB-C中药农残专用柱
500mg/6mL; 30/pkg
HLBC60-060500-1
血竭、补骨脂、吴茱萸、花椒、姜黄、莪术、红花、连翘、青蒿、辛夷、香附、沉香、降香、檀香等富含挥发油、色素和生物碱类气质质测定项目
适用于重油重色素和生物碱的果实和种子类中药,GC-MS/MS样品分析需2mL样品上柱净化
固相萃取方法3
SelectCore GCB/NH2-II 固相萃取柱
500mg/500mg/6mL; 30/pkg
GN100-061000-2
色素含量多,含少量挥发油如:金银花、菊花、款冬花、忍冬花、益母草、淫羊藿、龙胆草、大黄、虎杖、何首乌、麻黄、苦丁茶、刘寄奴、山银花、忍冬藤、川牛膝、地黄、桑叶
注意事项:
洗脱液中有甲苯,毒性较大,且洗脱时间较长;
对磺隆类农药有一定吸附LC-MS/MS样品分析时应联合其他净化方式分析磺隆类数据
SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱
500mg/500mg/6mL; 30/pkg
GNA100-061000-1
紫草、黄连、黄柏、何首乌、干益母草、吴茱萸、虎杖、大黄、决明子、胡黄连、苕叶细辛、菊花、千里光、蒲公英、艾叶、荆芥、茵陈、金银花、番泻叶、龙胆草、蛇床子、川乌、草乌、车前子、地耳草、金钱草、薄荷、广藿香、老鹳草、紫苏叶、忍冬藤、栀子、连翘、莲子心、竹叶柴胡、矮地茶、红景天、麻黄、白鲜皮、赶黄草、款冬花等
注意事项:
适用于干扰较为严重的GC-MS/MS样品分析。若用于LC-MS/MS样品分析,应联合其他净化方式
液相色谱柱
ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm
货号:S013-026018-02110S
气相色谱柱
NanoChrom BP-50+MS, 30m×0.25mm×0.25μm
货号:G5025-3002
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