2022-08-19 19:25:29
点击上方蓝字 关注我们
纳谱分析色谱柱产品
液相色谱柱通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8、C4、C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱、GPC柱、聚合物填料柱等。
重
点
介绍
Highlights
液相色谱柱的活化方法、维护与注意事项
色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温、测试系统(仪器的死体积)等条件的差异而有所不同。
所以在实验室最好建立自己的色谱柱台账,对每根色谱柱进行编号入库、并追踪其使用过程,实现全生命周期化管理。每个时间节点记录其柱压、峰型、进样针数等信息。
新买的液相色谱柱需要活化,活化的方法因柱子而异,普通反相C18柱的话我是这样活化的:0.5 ml/min流速的甲醇冲洗2小时以上。液相的新色谱柱都是保存在一定的保存液中的,所谓的活化就是替换掉其中的保存液,冲洗掉柱中可能残留的其他杂质,以免影响后续分析工作。
不同的色谱柱活化的方法不尽相同,要根据柱子的种类来选择活化方法。另外,要提醒的是,柱子活化时不要接检测器,避免不必要的污染。
其它问答,新买气相色谱柱活化时间多久合适?
急用的话,一两个小时足矣。一般都是晚上活化,不占用白天时间,一个晚上从低温到高温,再回到低温,很慢地改变温度走一遍就可以了。
液相色谱柱活化到底起到一个什么样的作用?
1.排除有机相挥发所产生的起泡。
2.柱子一般是键合了C18的,用甲醇冲柱子就是使得这些基团达到更好的排列,有利于我们做样。
01
色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在甲醇或乙腈水溶液中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和甲醇或乙腈水溶液互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!
操作步骤如下:
a.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡);
b.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用10—20%甲醇水“过渡”即每天分析开始前必须先用10—20%甲醇水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡;分析结束后必须先用10—20%甲醇水冲洗30分钟以上,除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子(此描述只针对反相色谱柱)。
02
色谱柱的清洗及再生
如果色谱柱在使用一定时间后出现异常,包括峰形的变化、拖尾、峰分裂、肩峰、高背压或柱效的变化,用户可尝试按以下步骤进行清洗。
正相/HILIC色谱柱:
极性固定相(如SiO2,NH2, CN, Diol, Amide, Imidazole基色谱填料)的清洗再生程序:
第一步:50% 0.1 M醋酸铵,pH5/50%乙腈(5倍柱体积)
第二步:100% 0.1 M醋酸铵,pH5(5倍柱体积)
第三步:50% 0.1 M醋酸铵,pH5/50%乙腈(5倍柱体积)
第四步:100%乙腈(10倍柱体积)
第五步:100%异丙醇(10倍柱体积)
第六步:100%乙腈(5倍柱体积)
第七步:使用前用20倍柱体积的流动相平衡色谱柱
注意:
a.在对色谱柱进行清洗再生时,为了避免色谱柱上的污染物或其他物质进入流通池,需断开色谱柱与检测器之间的连接。
b.在对色谱柱进行清洗再生时,建议使用平时使用流速的10-50%进行操作,防止因溶剂粘度过大而造成柱压的激增。
c.当遇到高背压情况时,可以按上述程序进行反冲色谱柱。
反相色谱柱:
非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的清洗再生程序:
第一步:50%去离子水/50%甲醇或乙腈(5倍柱体积)
第二步:80%去离子水/20%甲醇或乙腈(5倍柱体积)
第三步:80%(含0.1%EDTA水溶液)/20%甲醇或乙腈(10倍柱体积)
第四步:80%去离子水/20%甲醇或乙腈(5倍柱体积)
第五步:100%甲醇或乙腈(5倍柱体积)
第六步:100%异丙醇(10倍柱体积)
第七步:100%甲醇或乙腈(5倍柱体积)
注意:
a.在对色谱柱进行清洗再生时,为了避免色谱柱上的污染物或其他物质进入流通池,需断开色谱柱与检测器之间的连接。
b.在对色谱柱进行清洗再生时,建议使用平时使用流速的10-50%进行操作,防止因溶剂粘度过大而造成柱压的激增。
c.当遇到高背压情况时,可以按上述程序进行反冲色谱柱。
d.在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1 M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
e.0.05 M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05 M稀硫酸冲洗非常有效。
03
色谱柱的维护
a.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
b.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围
c.避免流动相组成及极性的剧烈变化
d.流动相使用前必须经脱气和过滤处理
e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中
f.氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
在工作中,要好好爱惜色谱柱,没事多冲一冲色谱柱,不然它一发脾气,项目进度就.....玩完了 ~
篇幅问题,本文分上下两篇,敬请期待下期内容~
(本文部分节选于网络,如有侵权请联系删除,谢谢您的配合~)
纳谱分析可提供色谱柱免费试用,申请方法如下:
1►扫描右侧二维码进行试用申请。
2►点击文末“阅读原文”进行试用申请。
3►电话咨询:4008083822,或可在公众号后台留言,直接在线申请试用。
关注我们,更多干货分享
我们坚持以质量、创新和服务为广大色谱工作者提供优质的色谱分离产品和技术支持。
产品应用涉及小分子药物及多糖分析、生物分离、DNA/RNA核酸分离、手性拆分和样品前处理等。
纳谱分析技术(苏州)有限公司
点击阅读原文 申请色谱柱试用
+
03-06
“第四届客户关怀季”莱伯泰科售后直播专场即将开启,快来报名吧!03-06
邀请函 | 莱伯泰科邀您相约第十三届中国病理年会03-06
分析的力量 | 精密分析的“火眼金睛”,让“隐形杀手”无处遁形03-05 安捷伦科技
名单公布!快来看看《2020 年版〈中国药典〉中药标准物质分析图谱》究竟花落谁家?03-05 安捷伦科技
新能源 大时代 | 安捷伦携全套分析方案护航新能源电池产业链03-05 安捷伦科技
新型 AdvanceBio 酰胺 HILIC 色谱柱,一键实现多聚糖分离分析03-05 安捷伦科技
体察万象,绿色引航 | 一册概览安捷伦GC/Q-TOF新污染物应用方案03-05 安捷伦科技
从不断跨界,到打通氢能底层逻辑,听听她的故事03-05 安捷伦科技
Ultim Max 170能谱仪分析NASA“贝努”小行星样品03-05
沃特世脂质偶联ASO LC-MS 标准品,助力寡核苷酸分析03-05 沃特世技术服务
工程师说仪器 | 您的新机保养指南03-05 沃特世技术服务
“钾”如你相信光,“钠”就有无限能量03-05 飞飞
使用349NX激光器进行SiC的拉曼光谱和光致发光实验03-05 圈内人都会关注
即将开课|哈希在线产品培训火热报名中03-05
客户案例 | eBioMedicine:单一组学如何发10+分?请看这项针对中国男性肝癌风险生物标志物的前瞻性研究03-04 麦特绘谱
想少生病?记得给免疫系统“解压”03-04 HMI
绘谱导读 | 为反式脂肪酸“正名”!可促进抗肿瘤免疫!「202402」03-04 麦特绘谱
活动报名 | 牛津仪器地质矿物显微分析技术研讨会03-04
展会资讯 | 爱色丽诚邀您参观2024华南国际印刷展03-04 爱色丽彩通