湿热灭菌方法验证默克Sterikon® plus来帮您

湿热灭菌法作为一种主要的最终灭菌工艺，灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌工艺，也是灭菌工艺选择时优先选用的灭菌工艺。

欧美均有对于灭菌工艺验证的相关要求^[1] : 美国注射剂协会(Parenteral DrugAssociation，PDA)的系列技术报告1号《湿热灭菌程序的验证:灭菌程序的设计、开发、确认及日常监控》、30号《采用湿热灭菌法的最终灭菌药品及医疗器械的参数放行》和48号《湿热灭菌设备系统: 设计、试车、运行、确认和维护》^［7］欧洲EMA于2019年发布了《制剂、原料药、辅料和内包材灭菌指南》。

2020版《中国药典》和2010版《药品生产质量管理规范》对生物指示剂的验证有详细要求，其他制药工艺验证中也提到湿热灭菌，《除菌过滤技术及应用指南》、《无菌工艺模拟试验指南( 无菌制剂) 》等指南，其次对病原生物实验室而言，实验室根据菌（毒）种、生物样本及其他感染性材料和污染物，可选用压力蒸汽灭菌方法，并定期对灭菌效果进行监测。

故湿热灭菌的重要性不言而喻，其方法验证则至关重要。

湿热灭菌法是指将灭菌物品置于灭菌柜内，利用高压饱和蒸汽或过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸变性而杀灭微生物的方法。湿热灭菌法无论采用何种灭菌参数（灭菌温度和灭菌时间），都必须确保物品灭菌后的无菌水平SAL≤10^-6。该灭菌方法验证采用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（Spores of Bacillus stearothermophilus，ATCC7953），孢子被杀灭程度是评价一个灭菌程序的有效性最直观的指标，要求生物指示剂每片（或每瓶）的孢子数为5×10⁵～5×10⁶，物品灭菌后的无菌水平SAL≤10^-6。

生物指示剂的初始微生物的数量、耐受性（菌体耐受性）和放置的位置、方式等情况都会影响其灭活效果。

在湿热灭菌工艺中，生物指示剂的使用是通过生物学的方法来验证其灭菌效果其中孢子数量和以D值表征的对灭菌工艺的抗性是主要性能

孢子数量是衡量灭菌工艺生物杀灭力的重要参数，商品化湿热灭菌用生物指示剂的孢子数量基本控制在10⁶ 的数量级。

D值定义为在规定的暴露条件下，灭活90%的试验菌所需的时间或辐射剂量，是微生物对于暴露损伤抵抗力强弱最直接的表征,只要D值足够，即使初始微生物数量低于10⁶,使用生物指示剂仍然可以验证其灭菌效果。

一款符合法规要求，安全，操作简单， 结果清晰便于观察的湿热灭菌生物指示剂更加能方便工作流程。

生物指示剂的安瓿瓶内含有营养肉汤，糖，PH指示剂，嗜热脂肪芽孢ATCC7953(最佳产孢状态)

抗热性芽孢在高压蒸汽温度121±0.5℃(245Kpa)下，15分钟才会被完全杀死。较低温度或较短灭菌时间条件下，部分孢子仍会存活并能够生长。

灭菌后，60±2℃培养24-48小时。同时使用未经灭菌的一瓶指示剂作对照。灭菌充分，安瓿瓶仍为紫红色。灭菌不充分，24小时会变成黄色。

[1]肖璜1，马仕洪1，崔强2，胡昌勤1*.应用于湿热灭菌的生物指示剂现状与分析[J]. JOUＲNAL OF MICＲOBIOLOGY Aug.2014 Vol.34 No.4:1-2

[2]赵娜，石靖，许真玉，李珊珊. 化学药品注射剂灭菌工艺研究及验证的基本考虑[J]. Chinese Journal of New Drugs.2021,30(16)

[3]宋文光.余军阳.吴美英.浅析生物指示剂在制药工艺验证中的应用[J]. 机电信息.2017.05.002

[4]中国药典2020版第四部9 2 0 7灭菌用生物指示剂指导原则

[5]病原微生物实验室生物安全管理条例（2018 年修订）

[6]上海市二级生物安全防护实验室管理规范

[7]WS 233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则