行业标准 | GB 31658.6 四环素类药物残留量的测定LCX柱固相萃取优化方案

在标准GB 31658.6-2021《动物性食品中四环素类药物残留量的测定 高效液相色谱法》中，采用反相聚合物小柱和磷酸化聚合物小柱配合，以实现动物源性样品深度净化的目的。但在标准的使用过程中，发现了回收率不理想的状况。

经过分析，我们发现目标物的损失可能发生在LCX小柱对四环素类药物的吸附效率上。标准中，提取液先经反相聚合物小柱净化， 然后用6mL甲醇洗脱目标化合物，最后向甲醇洗脱液中加入2mL水稀释后成为下一步LCX小柱的上样液。

从这个操作和SPE小柱的作用原理看，有两方面可能的原因造成吸附效率低。一是上样液有机相比例过大，洗脱能力太强；二是四环素类抗生素离子化不充分，与LCX小柱的磷酸官能团结合效率低。经过多次实验，最终确定将2mL水换成2 mL 8 mM磷酸二氢钠水溶液（pH5.0），通过溶液pH值的调整，增强填料对药物的吸附效率，最终回收率达到要求。

还有一点优化：标准中最后的2mL上机溶液里含有0.4mL的甲醇，检测发现会出现比较强的溶剂效应，所以在改进方法里直接用草酸溶液（0.01 M）定容至2 mL上样检测，消除了溶剂效应。