2022-06-18 09:54:16, SCIEX SCIEX
Multi-Attribute Method(MAM)是基于质谱的一种自动化分析方法,可以实现在生物制品研发和生产过程中,用质谱方法一次进样同时监测多个产品质量属性(PQA),从而将质谱这一传统意义上用于研发的分析技术,应用于产品放行。如何可信地表征生物制品的关键质量属性(PQA)一直是生物制药企业MAM技术的核心问题。基于碰撞诱导解离(CID)的MAM工作流程通常需要结合互补的MS/MS技术用于鉴定氨基酸同分异构体等PQA。传统的ExD碎裂受限于过长的循环时间和低灵敏度,无法在单针进样的情况下实现相关PQA的MAM分析流程,而基于全新电子活化解离(EAD)的MAM技术,单针进样即可准确,快速,灵敏且可重现地分析生物制品的PQA,如氨基酸同分异构体等。
多质量属性监测MAM:
MAM是一种功能强大的LC-MS方法,用于同时监测和量化生物制品的多个产品质量属性(PQA)或关键质量属性(CQA)。传统意义上,基于CID的MS/MS被用作鉴定的第一步,然后使用基于MS或MS和MS/MS工作流进行量化。然而,基于CID的MS/MS方法不可能对发生脱酰胺化的肽段进行全序列确认,包括区分亮氨酸与异亮氨酸、天冬氨酸与异天冬氨酸(Asp vs. isoAsp)以及脆弱修饰(如糖基化)的定位。因此,基于CID的鉴定工作流程必须依赖于互补的MS/MS技术,在对所选物种进行量化之前,在单独的实验中使用其他更先进的仪器。我们可以使用基于EAD的平台方法5,6解决这一挑战,该方法能够在单针进样中使用MAM对PQA进行可靠、准确的识别、量化和监测(图1)。
点击查看大图
图1:基于EAD的MAM工作流程。ZenoTOF 7600系统提供的EAD平台方法1-4为序列确认和翻译后修饰(PTM)的识别提供了可靠的肽图结果,并能够区氨基酸分异构体。这是MAM获得这些PQA和CQA准确量化结果的先决条件。用于肽图分析的Biologics Explorer软件和用于PQA和CQA量化的符合合规要求的SCIEX OS软件的结合,使基于EAD的MAM工作流成为一个简化的单针进样过程。
基于EAD的MAM工作流的主要特点:
1
可靠的PQA识别和氨基酸异构体区分:单针进样的EAD平台方法可以区分氨基酸异构体和翻译后修饰(PTM),这对传统表征和MAM方法具有挑战性。
2
简化的数据流:可定制的PQA列表将Biologics Explorer软件中的肽图结果与符合合规性要求的SCIEX OS软件将PQA量化和监测关联起来。
3
强大的肽图软件:Biologics Explorer软件为肽图分析和PQA选择提供了强大的算法和优化的工作流。
4
合规性:PQA量化和监控。
MAM流程概述:
点击查看大图
图2:Biologics Explorer软件结合合规软件SCIEX OS的MAM工作流。在此流程中,使用Biologics Explorer软件从EAD DDA数据的肽图中非常可信地确定了mAb的PQA。选择感兴趣的PQA并将其导出到.txt文件,然后导入到使用SCIEX OS软件的分析模块创建的处理方法中。峰面积积分使用MQ4算法执行,然后创建用于相对PQA量化和监测的自定义模板。报告功能提供了许多用于自定义和选择不同文件格式的选项,例如word文档和pdf文档。
PQA的监控:
分析模块提供了充分的灵活性,可以在处理方法中构建自定义公式,用于计算PQA的丰度百分比7-8。图3显示了VVSV肽段PQA的量化结果,该结果是通过将带有自定义公式的处理方法应用于NISTmAb对照品的3次重复进样,并持续给予加热压力而获得。考虑到定量结果的严格性,计算的百分比丰度在CID和EAD方法中均具有高度的重现性(%CV<10%)。
点击查看大图
图3:SCIEX OS软件的分析模块对PQA的相对定量结果,图标列出了以NISTmAb为对照,热压情况下三次进样VVSV肽段的异构化和脱酰胺化峰面积的丰度百分比。
从0天到10天持续给与加热压力,脱酰胺化程度Asp和不同isoAsp形式的百分比值显著增加。为了快速检查结果,SCIEX OS软件提供了用于可视化的度量图(图4A),或者可以使用其他绘图选项在Excel中导出和处理结果(图4B)。
点击查看大图
图4:MAM的可视化结果。图(A)和图(B)都展示了重复进样的PQA量化的重现性,以及MAM工作流监测PQA丰度百分比的能力,以用于不同时间节点研究。
总结:
1.PQA的可靠识别及氨基酸异构体的明确区分对于MAM的成功实施至关重要。
2.通过基于EAD碎裂的DDA采集方法,可以区分脱酰胺作用中的Asp和isoAsp异构体,脱酰胺化是PQA的一个重要类别,可能影响药物的疗效和安全性。
3.通过现成的工作流程模板,Biologics Explorer软件实现了高效识别,该模板提供了可靠的肽图结果和可视化工具,能够将PQA列表导出到SCIEX OS软件进行量化。
4.符合法规要求的SCIEX OS软件为PQA的峰提取和相对定量提供了强大的算法和工具。
5.通过Biologics Explorer软件和合规的SCIEX OS软件之间的数据流,实现了从识别到量化的有效MAM工作流。
扫描二维码查看相关资料
声明:版权为 SCIEX 所有。欢迎个人转发分享。其他任何媒体、网站如需转载或引用本网版权所有内容须获得授权, 转载时须注明「来源:SCIEX」。申请授权转载请在该文章下“写留言"。
喜欢就点在看哟
10-20 镁伽
【纳谱资讯】治疗性蛋白药物液相色谱表征与分析研讨会成功举办!10-20
阿尔塔双11钜惠,惊喜好礼送不停!10-20
支持山区科技教育,安捷伦公益月成功举办10-20
《色谱柱选型与维护》北京线下技术交流会圆满举办10-20
乔迁大吉 | 启新程•创新篇,华仪宁创新办公楼启用!10-20
虹科活动 | 探索全新AR应用时代,虹科AR VIP研讨会广州场回顾!10-20 虹科数字化与AR
虹科直播 | 10月23-26日干热灭菌工艺和设备验证应用主题直播周重磅来袭,每晚8点-9点半不见不散!10-20 虹科环境监测技术
【圆满落幕】广州多肽与核酸药物前沿创新论坛,月旭科技携相关产品亮相10-20 市场宣传部
方案推荐|基于紫外可见光纤光谱仪在合成祖母绿鉴定中的应用10-20
【会议预告】青岛腾龙诚邀您共赴金秋十月会议~~~10-20
用户前沿丨北京大学,最新钙钛矿Nature!10-20
布鲁克X射线广东省用户交流会成功举办10-20 布鲁克
布鲁克三维X射线显微镜(显微CT)在文物考古领域的应用——北京科技大学科技史与文化遗产研究院刘思然教授团队最新成果介绍10-20 王金波
日立诊断,“职”“位”等你10-20
临床检验项目自动审核系统的建立与优化10-20 孙汝林 夏骏
【知识库】如何做到蛋白质电泳迁移率的精确可重复性测量?10-20 周紫微,李航伟
【学术会议】马尔文帕纳科全新NTA即将亮相第七届细胞外囊泡大会10-20
岛津源创体|聆听百年岛津的品牌之声(文末有福利)10-20 企划部
携手中科院广州地化所,揭示轮胎磨损与水源污染“蝴蝶效应”10-20 分析中心