解决方案 | 2020版《中国药典》2351中药玉米赤霉烯酮测定解决方案

2022-06-09 13:45:07 北京莱伯泰科仪器股份有限公司

前言

随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。

玉米赤霉烯酮又称F2毒素，主要由镰刀菌产生，是一种雌激素真菌毒素，广泛存在于霉变的玉米、高粱等谷类作物以及奶类制品中，主要作用于生殖系统，具有较强的生殖毒性和致畸作用，能导致动物不孕或流产，如果在中药存在玉米赤霉烯酮，可能会对患者产生安全隐患。

本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的玉米赤霉烯酮测定法，使用LabTech SPE 1000全自动固相萃取系统对常用中药（人参、枸杞、大枣）的玉米赤霉烯酮进行富集净化，采用LC-MS检测，建立了一套中药的玉米赤霉烯酮处理检测方法，采用免疫亲和柱净化样品，此方法回收率及平行性良好，标准曲线R²>0.99，加标回收率为92.8%~94.1%，重复性RSD为1.3%~2.8%，满足检测要求。

关键词：SPE 1000 2020版《中国药典》玉米赤霉烯酮 2351通则

1.仪器设备及试剂

1.1 仪器设备

1.1.1 SPE 1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

1.1.2 SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500质谱系统（SCIEX中国公司）；

1.1.3 MiniLab3000全自动液体样品处理平台（莱伯泰科公司）；

SPE 1000全自动固相萃取系统

MiniLab3000全自动液体样品处理平台

1.2 试剂及耗材

1.2.1 甲醇（色谱级）；

1.2.2 蒸馏水；

1.2.3 赭曲霉毒素免疫亲和柱（3mL，Beacon）；

1.2.4 赭曲霉毒素A标品溶液（购自坛墨质检）；

1.2.5 氯化钠；

2.试验方法

2.1 样品处理

分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验，取供试品粉末约5g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠1g，精密加入90%乙腈溶液25 mL，均质2min（11000r/min），离心10min（4000r/min），取上清液5mL，用水稀释至25mL，离心10min（4000r/min），取上清液10mL作为后续实验样品。

2.2 免疫亲和柱净化

将2.1的10mL样品放入SPE 1000全自动固相萃取系统，按照图1所示的方法进行样品的净化步骤，收集净化液，用0.22μm滤膜过滤，待后续处理。

图1 玉米赤霉烯酮净化流程

2.3 基质加标回收率实验

标准曲线配制：取对照品母液至MiniLab3000全自动液体样品处理平台上，按图2方法配制标曲。

图2 MiniLab3000全自动液体样品处理平台玉米赤霉烯酮标曲配制流程

按2.1方法准备样品，进行加标实验，按药典所规定的定量限4μg/kg进行加标，然后按照2.2方法进行前处理实验，同时进行3个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。

2.4 LC-MS分析条件

2.4.1 液相色谱条件

色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

流动相：A:水；B:甲醇；

流速：0.3 mL/ min；柱温：40℃；进样量：5 μL；

洗脱梯度：0min，55%B；5min，90%B；7min，90%B；7.1min，55%B；10min，55%B；

2.4.2 质谱条件

离子源：ESI源，MRM模式，负离子模式；

离子源参数：

IS电压：-4500V 气帘气CUR:25 psi；

雾化气GS1:60 psi 辅助气GS2:60 psi；

源温度TEM:550 ℃ 碰撞气CAD: 9 psi；

3.结果与讨论

3.1 各样品色谱图

图3 标准工作液LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）

图4 基质加标LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）

3.2 标准曲线

按2.3中的配制的对照品溶液计算得出标曲（以相对峰面积和浓度作标准曲线) 的线性方程、相关系数，见图5。

图5 玉米赤霉烯酮标准曲线

3.3 加标回收率

加标样品经免疫亲和柱净化后，分别进行LC-MS分析、定量，计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表1所示。

表1玉米赤霉烯酮加标回收率

4.结论

由图5、表2可知，2020版《中国药典》2351通则中玉米赤霉烯酮测定法的标准曲线R²>0.99，加标回收率为92.8%~94.1%，重复性RSD为1.3%~2.8%，满足检测要求。

综上所述，莱伯泰科SPE 1000全自动固相萃取系统及MiniLab3000全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2351通则中规定的玉米赤霉烯酮测定，适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。

参考文献：

[1] 谭婧,郑润生,王文丽,徐晖.中药饮片中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的液质联用检测分析[J].时珍国医国药,2012,23(10):2469-2472.

[2] 中华人民共和国药典2020年版. 四部［S］.2020: 30ChP 2020. Vol Ⅳ［S］. 2020: 30.

关于莱伯泰科

北京莱伯泰科仪器股份有限公司（股票代码：688056.SH）成立于2002年，是一家专业从事实验分析仪器的研发、生产和销售的科技型公司。公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，持续通过高新技术企业认证，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”，是全球范围内能将多种类和多功能的样品前处理技术与全自动实验分析检测平台组合成全自动实验分析仪器系统的主要实验分析仪器供应商之一。

公司拥有LabTech、CDS、Empore等行业知名品牌，在中国和美国设有研发和生产基地，并在中国内地主要城市、中国香港、美国马萨诸塞州和宾夕法尼亚州等地设有产品营销和服务中心。公司产品服务涵盖实验室分析仪器、样品前处理仪器、实验室设备、医疗设备、实验室耗材和实验室工程建设等，可为全球多种类型用户提供从实验室建设到样品分析的一站式解决方案。目前，公司产品已销往全球90多个国家，累计服务客户3万余家。

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