解决方案|高效液相色谱法测定牛初乳粉中免疫球蛋白IgG

牛初乳通常是指奶牛分娩后7d特别是3d 内所分泌的乳汁。目前，牛初乳作为一种功能性食品的原料已经受到普遍关注，它的特殊性首先体现在其化学组成及活性物质的含量上。牛初乳免疫球蛋白（Ig）总量约为 50~100 mg/mL，其中80% 以上是IgG。免疫系统发育不健全的新生牛犊吸收的IgG以未消化的状态直接通过肠壁进入血液而获得被动免疫，这种被动免疫可保护犊牛免受外来疾病的侵袭。

目前，国内外测定IgG的方法有酶联免疫吸附法、琼脂单、双向扩散法、放射免疫法、高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高等优点，本文根据国家标准GB/T 5009.194-2003《保健食品中免疫球蛋白IgG的测定》，建立了利用高效液相色谱LC-5520测定牛初乳粉中免疫球蛋白IgG的方法，供相关乳制品企业质量控制部门人员参考。

LC-5520液相色谱仪

实验原理

根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH 2.5 的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。

仪器设备与试剂

实验条件

色谱柱：Pharmacia HI-Trap Protein G 柱，1 mL；

流动相A：pH 6.5，0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液；

流动相B：pH 2.5，0.05 mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液；

流  速：0.4 mL/min； 

检测波长：280 nm；

进样量：20 μL。

样品处理

称取 0.1 g（精确至 0.001 g）试样，用流动相A稀释至25.0 mL，摇匀，通过0.45 μm微孔滤膜后进样。

图1  IgG标准曲线

样品分析

将试样待测液进行色谱测定如图2所示。记录色谱峰峰高，根据标准曲线计算出试样待测液中IgG的浓度。

图2 奶粉IgG图谱

根据标准曲线计算结果：某品牌牛初乳 IgG含量为：1.08mg/mL 。