2022-04-14 17:33:50, 默克分析化学 默克生命科学
生物药一般仅靶向特定分子,具有很高的特异性,生物活性,和生物相容性。但由于生物药来源于生物,具有很高的多样性、复杂性和随机性,使用一般的分析技术难以对其进行准确的测定。在众多的新型分析技术中,高效液相色谱——质谱联用技术(HPLC-MS)可以高分辨率、高灵敏度地满足生物药行业快速增长的需求。而高效液相色谱(HPLC)作为质谱检测的前端技术,其分辨率将决定检测方法的准确性。
蛋白质的分析通常分为“由下至上”和“由上至下”两种方法。所谓的“由下至上”是指在进行质谱检测前将蛋白质酶解成为分子量较小的肽段,使用HPLC分离后再使用质谱方法对肽段的氨基酸序列进行测定,是准确测定蛋白质结构的重要方法。由于酶解得到的多肽数量众多,因此高分辨率的色谱柱显得十分重要。
Supelco® BIOshell™ Peptide (160Å) HPLC色谱柱采用Fused-Core® 熔融核颗粒作为固定相。相比于传统的全多孔颗粒,其均一的粒径和较小的传质相有助于得到更窄的色谱峰,从而在高流速下获得更高的分辨率,是多肽分离的理想选择。
不同于“由下至上”的分析方法,“由上至下”是指对完整形态的蛋白质进行直接的分析。整体蛋白质的分子量通常在几千到几万道尔顿,而生物药的主力单克隆抗体分子量更是可以高达几十万道尔顿。而这些大分子难以进入传统的小孔径填料的孔道中,导致较差的保留性和峰展宽、峰拖尾等不良效应。为了有效对蛋白质进行保留和分离,通常需要使用孔道尺寸在300-1000 Å的固定相。
Supelco® BIOshell™ 反相色谱柱有Protein (400 Å)和IgG (1000 Å)两种不同孔径的填料,分别用于常规分子量的蛋白质以及大分子量的mAb的分离。BIOshell™ 反相色谱柱同样采用Fused-Core® 熔融核颗粒作为固定相,因而能够实现快速、高分辨率的分离分析。由于许多蛋白质与C18固定相有极强的相互作用,导致难以洗脱,因此通常使用极性较大的C4或C8作为分离的选择。使用BIOshell™ A400 Protein C4, 5 cm x 2.1 mm I.D., 3.4 µm 填料粒径色谱柱可以在短短一分钟内实现对6种不同蛋白质的高分辨率分离。
对于分子量可达到几十万道尔顿的ADCs,需要选择1000 Å孔径的固定相填料。相比于使用300 Å孔径的填料,BIOshellTM A1000 IgG C4, 15 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 µm填料粒径的色谱柱能够实现对mAb的不同异构体实现高分辨率的分析。
抗体上不同的多糖链对抗体的选择性、结构以及稳定性都有重要的影响,因此对这些多糖进行分析也是生物药质量控制过程的重要程序。因为多糖都是强极性的化合物,含有大量亲水的羟基,因此其在反相色谱柱上往往保留较弱。为了对多糖进行分离,需要使用亲水作用色谱(HILIC)。与反相色谱不同,HILIC用水相作为强洗脱相,因此能够对亲水性和极性较强的化合物进行分离,是糖链分析的最佳选择。使用BIOshell™ Glycan HILIC色谱柱能够对IgG上释放的16种不同结构的多糖链进行分离分析。
试用型号涵盖默克Ascentis Express、BIOshell、Chromolith、Dicovery、Purospher® STAR、Supel™ Carbon等众多明星产品系列,多达146根色谱柱!
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