告别乳化，ISOLUTE® SLE+固相支撑液液萃取

2021-12-08 13:12:23 拜泰齐贸易（上海）有限公司

液液萃取（Liquid Liquid Extraction, LLE）是样本前处理的经典方法之一，该方法具有方法开发难度低、操作简单、适用性广等特点。但在实际操作中，也存在着回收率低、重现性差、自动化处理难度高等缺陷。特别是对于生物检材，样本中含有大量具有表面活性特性的物质，在液液萃取过程中极易形成乳化层，增加操作难度的同时也降低了目标化合物的回收率。

图1. 人血清用庚烷萃取时形成的乳化层

图1所示为400 μL庚烷与100 μL人血清进行液液萃取时形成的乳化层。如图所示，红色标记部分的乳化层占据了样本体积的绝大部分。

ISOLUTE^® SLE+固相支撑液液萃取（Supported Liquid Extraction, SLE）产品使用改性的硅藻土做为填料，水性的样本吸附于填料微孔中形成不会移动的微液滴层，当不亲水的有机溶剂流经填料表面时，溶剂与样本之间形成连续的浓度差，使目标分析物被高效率萃取到溶剂中。整个过程完全模拟了传统液液萃取的过程，并且能够得到更好的回收率和重现性。

图2. ISOLUTE^® SLE+工作原理示意图

下面我们通过一个小实验，简单演示ISOLUTE^® SLE+固相支撑液液萃取的实验效果。

实验材料包括：牛奶，ISOLUTE^® SLE+小柱，脂溶性色素透明绿，水溶性色素诱惑红。

图3. 实验材料：牛奶，ISOLUTE^® SLE+小柱，

脂溶性色素透明绿，水溶性色素诱惑红

牛奶中含有大量的蛋白质和磷脂，在液液萃取的过程中非常容易形成乳化层，影响实验结果的准确性。染色后的牛奶样品如图4。

图4.染色后的牛奶样本

LLE实验取400 μL染色的牛奶与1 mL MTBE混合；SLE实验取400 μL 样本用1 mL MTBE进行萃取。萃取后结果如图5。

图5. 染色后牛奶样本分别进行LLE和SLE后的样品状态；

A: LLE；B: SLE

如图5A所示，在液液萃取过程中，溶剂和样本交界处形成了颜色不均一的乳化层，很难将萃取溶剂完全吸出，必须通过多次萃取才能得到较好的回收。图5B，通过SLE进行萃取后，样本及水溶性红色颜料全部保留在小柱内，萃取液清澈透明，没有乳化或分层。

对比两瓶萃取液的颜色，可明显看出在相同的溶剂条件下，通过SLE萃取的样本颜色更深，萃取效率更高（图6）。

图6. SLE和LLE萃取液比较

对于血液样本，在液液萃取的过程中难免有部分磷脂成分被溶剂共溶出。磷脂分子具有两亲性的活性基团，会在液质系统内残留，改变色谱峰形、增加色谱柱压力、抑制分析物离子化效率。图7为分别使用LLE和SLE萃取血清中脂溶性维生素时，样品中磷脂成分的信号响应图，在3.1分钟时，LLE方法有磷脂峰，信号强度是SLE方法的5倍左右。

图7. LLE和SLE萃取血清中脂溶性维生素，样品中的磷脂信号响应

结论

通过以上的实验结果我们可以看出，ISOLUTE^® SLE+可完全替代实验室传统的液液萃取，方法开发简单，消除了乳化现象，方法重现性好、操作简便、回收率高、易于自动化，是实现实验室高通量、高质量样本处理的有力工具。

Biotage提供96孔板和小柱形式的SLE耗材，规格从200 μL至10 mL样本量，可满足多种检测行业的需求。配合使用Biotage^® Extrahera^™ 全自动前处理平台可在30 分钟左右完成96个样本的前处理，极大地提高实验室的样品处理效率。

相关装置和耗材

产品名称和描述	订货号
ISOLUTE SLE+ 200 μL Plate	820-0200-P01
ISOLUTE SLE+ 400 μL Plate	820-0400-P01
ISOLUTE SLE+ 400 μL Columns	820-0055-BG
ISOLUTE SLE+ 1 mL Columns	820-0140-CG
ISOLUTE SLE+ 2 mL Columns	820-0290-D
ISOLUTE SLE+ 5 mL Columns	820-0690-E
ISOLUTE SLE+ 10 mL Columns	820-1420-F
Biotage^® 96位正压萃取装置	PPM-96
Biotage^® Extrahera^™高通量全自动样品前处理系统	414001
TurboVap^®96 Dual多功能全自动样品浓缩仪	418000

关于Biotage

Biotage（BIOT, NASDAQStockholm）是一家致力于解决社会问题的全球影响力科技公司。我们为药物发现和开发、分析测试以及水和环境检测方面的客户提供工作流程解决方案和产品。作为全球专业的样品前处理方案提供者和行业领先者，Biotage为样品分析前处理提供专业的自动化处理平台、耗材以及方法开发，如Extrahera™全自动样品前处理系统、TurboVap^®全自动氮吹浓缩仪、ISOLUTE^®和EVOLUTE^®样品前处理耗材等，帮助我们的用户提高工作效率的同时也显著改善了生物样品分析实验的数据质量。