2021-09-18 11:36:35, Dr. BEAVER
目前,随着FDA批准了美国公司Moderna研发的新冠肺炎疫苗mRNA-1273的紧急使用授权,基于mRNA的治疗方法越来越引起大家的兴趣,基于mRNA的研究也越来越多,所以,如何获得纯度高,质量高的mRNA越来越受到人们的关注。
真核细胞的mRNA是单顺反子,其最显著的特征是具有5''端帽子结构和3''端的poly A的结构,此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径,人们利用碱基配对原理,开发出寡聚(dT)纤维素或寡聚(U)琼脂糖亲和柱分离mRNA的方法,近几年mRNA的提取方法又有所改进和突破,其中就有mRNA的磁珠分离纯化方法。该技术主要包含2种方法,其一是用生物素标记的Oligo(dT)与mRNA3''端的poly A退火形成杂交体,然后用带有链霉亲和素的顺磁磁珠洗涤并捕获杂交体,形成杂交体-磁珠复合体,最后用磁架将此复合体捕获;其二是直接用Oligo(dT)磁珠捕获样本中的mRNA,进一步用无RNase无菌水洗涤,即可获得纯化的mRNA。
接下来,Dr. BEAVER就给大家介绍下 Oligo dT磁珠的工作原理及应用。
01
Oligo dT磁珠的工作原理及应用
Oligo dT磁珠是一种表面共价修饰了寡聚dT序列,利用磁珠表面的寡聚dT序列可以和mRNA的polyA尾之间的碱基配对,因此可以从真核总RNA或者细胞、动植物组织等多种样本中快速分离纯度高且完整的mRNA。经Oligo dT磁珠纯化的mRNA,可应用于RT-PCR, 固相cDNA文库构建、二代测序、Northern Blot分析、引物延伸、基因表达分析、RACE、RNA测序、亲和纯化、微阵列、cDNA微阵列、S1核酸酶分析、核糖体酸酶保护测定等分子生物学实验,还可进行mRNA疫苗的研究等。
Oligo dT磁珠示意图
02
国产磁珠品牌的崛起
海狸公司专注于纳米磁珠技术和产品开发。公司10年来,技术不断迭代,已经完成了第一代蛋白分离纯化磁珠、第二代核酸纯化磁珠及第三代免疫检测磁珠的研发和规模化生产。海狸技术团队经过2年多的研发和验证,推出BeaverBeads® Oligo (dT)磁珠,可用于mRNA的纯化。
Oligo (dT)磁珠产品特点:
表面活性位点丰富,mRNA捕获效率高
非特异性吸附低,mRNA纯度高
粒径均一,悬浮性好,沉降速率低
磁响应时间短,可适用于自动化操作
工业化规模生产,批次稳定
产品试用申请,限量20份
03
应用案例1
样本:人细胞Total RNA
上样量:300ng Total RNA
磁珠用量:20-50μL
实验结果:
实验结论:
实验操作过程中,BeaverBeads® Oligo (dT)磁珠的悬浮性与进口品牌D相当。从人细胞total RNA样本中纯化mRNA,采用荧光定量PCR对样本进行定量检测,对mRNA(特异性)和sRNA(非特异性)检测的Ct值偏差<0.1,两品牌磁珠无明显差异。
04
应用案例2
样本:植物Total RNA
上样量:600ng Total RNA
磁珠用量:20-50μL
实验结果:
实验结论:
实验操作过程中,BeaverBeads® Oligo (dT)磁珠悬浮性与进口品牌D相当,从植物的total RNA样本中纯化mRNA,采用荧光定量PCR对样本进行定量检测,对mRNA(特异性)和sRNA(非特异性)检测的Ct值偏差<0.15,两品牌磁珠无明显差异。
产品信息:
试用或询价请留言(试用装限量20份)
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