2021-06-29 17:44:43 上海仪电分析仪器有限公司
本方法以L-赖氨酸和L-蛋氨酸为例,对饲料等样品中十几种氨基酸的测定方法做一简要介绍。
一、方法原理
对氨基酸进行柱前衍生后,在254nm波长下,以保留时间定性,采用外标法分析时,需做标准曲线,无需加入正亮氨酸内标物。
二、所需仪器和试剂
仪器:
a.高效液相色谱仪含紫外检测器
(上海仪电分析仪器有限公司LC220);
b. 蒸发回流装置;
c.万分之一天平;
d.恒温水浴锅;
e.实验室常用玻璃仪器。
试剂:
a.L-赖氨酸和L-蛋氨酸标准品;
b.甲醇(色谱纯);
c.乙腈(色谱纯);
d.醋酸钠(分析纯);
e.乙酸(分析纯);
f.正己烷(色谱纯);
g.盐酸(分析纯);
h.苯酚(分析纯)。
三、实验方法
1.色谱条件
2.试剂配制
2.1 样品前处理溶液的配制
6mol/L的盐酸溶液:将盐酸溶液(36%-38%)与超纯水等体积混合,混匀;
0.1mol/L的盐酸溶液:取8.3mL盐酸溶液(36%-38%),用水定容到1000mL的容量瓶中,混匀;
0.1%苯酚的6mol/L的盐酸溶液:移取20μL苯酚,加入20mL6mol/L盐酸溶液中,混匀。
2.2 混合标准品溶液的配制
准确称量赖氨酸、蛋氨酸标准标准品配制成2.5μmol/mL的赖氨酸、蛋氨酸标准溶液,用0.1mol/L的盐酸溶液稀释成2.5、1.25、0.5、0.25、0.125μmol/mL系列浓度绘制标准曲线,4℃冷藏保存。
2.3 衍生试剂的配制
三乙胺溶液:准确吸取1.4mL三乙胺至10mL容量瓶中,用乙腈定容,摇匀,即得;
异硫氰酸苯酯溶液:准确移取250μL异硫氰酸苯酯至10mL容量瓶中,用乙腈定容,摇匀,即得。
3.样品处理
3.1 前处理
准确称取0.1000g样品于50mL圆底烧瓶中,加入10mL0.1%苯酚溶液溶解,110℃条件下加热回流24h,反应完成后,冷却,转移到100mL容量瓶中,定容。量取50mL溶液蒸干,用水定容至2mL,待衍生。
3.2 衍生反应
准确量取水解后溶液及氨基酸标准品0.2mL,分别置于1.5mL离心管中(内标法需往每支离心管中准确加入正亮氨酸内标50μL),然后分别加入三乙胺乙腈溶液0.1mL和异硫氰酸苯酯乙腈溶液0.1mL,摇匀室温静置衍生1小时。衍生结束后分别加入0.4mL正己烷,密封后剧烈振荡5~10s,静置分层,取0.2mL下层溶液和0.8mL水混合,过0.45μm有机系针式过滤器,待上机分析。
四、实验结果
1.标样谱图
2.样品谱图
3.标准曲线
蛋氨酸标准曲线
y=289746.8125x-8752.5,R=0.9996
赖氨酸标准曲线
y=478883.6875x-426.25,R=0.9998
4.结果计算
备注:
07-01 英斯特朗
连载 | 药物一致性评价与粒度分析(三)07-01 欧美克仪器
【仪器百科】LS-909丨干湿二合一激光粒度分析仪07-01 欧美克仪器
标准物质解决方案 | PFASs(全氟及多氟化合物)06-29
第九期阿尔塔有约 | 环境专题【新污染物:PFAS】技术研讨会精彩回顾及提问解答06-29
“绿色技术范式”,分析化学未来发展方向——访中国分析测试协会副理事长、辽宁省分析科学研究院原院长刘成雁教授06-29 转载仪器信息网
华西医院-标准型数显脑立体定位仪、双通道体温维持仪、体式显微镜安装完成06-29 迈越生物
科鉴检测助力2家仪器企业获得首批产品可靠性认证证书06-28 科鉴检测
德国耶拿:锂电池生命周期分析解决方案06-28 德国耶拿
AI已来!生命科学本科教学如何紧跟技术浪潮06-28 Opentrons
盛瀚售后,五星级服务的秘诀是什么?06-28 SHINE
专为汽车制造商打造的柔性解决方案——实现制程控制06-28
西北工业大学-脑立体定位仪安装完成06-28 迈越生物
会议邀请 | 第九届海上检验医师论坛06-28
卓立要闻 | 创新发展ing…6月卓立“大事小情”速览06-28 光电行业都会关注
打造信任合作伙伴!2024年度卓立汉光客户满意度调查开启06-28 光电行业都会关注
如何挑选适用于三阶光学非线性的测量系统?Z扫描测量系统来助力!06-28 光电行业都会关注
招聘启事—中国科学院沈阳自动化研究所微纳光学测量表征技术课题组06-28 光电行业都会关注
谱育科技作为主要完成方 荣获2023年度国家科学技术进步一等奖和二等奖06-28 点击关注→
仪器原理丨顶空仪与吹扫捕集仪科普小知识06-28 天美色谱