2021-01-28 16:58:39, 基泰生物 上海基泰生物科技有限公司
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HPLC空白实验值偏高怎么办?
当空白试验值偏高时,影响因素有很多,例如:试验用水、试剂、量器和容器的沾污、测量仪器的性能及试验环境的状态等,需要具体案例具体分析。
高效液相空白色谱柱出峰
Q:高效液相色谱,色谱柱是Kromasil C18(15cm*5Um),流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水,走空白色谱柱时在整个保留时间的中间位置出现较大的色谱峰,走了好几针空白,每针的响应都不同,有的很高,有的又很低,但杂峰一直存在,不像是色谱柱里有杂质,用流动相冲洗后依然出现此问题,什么原因?
A:
1、确定检测波长,如果是末端吸收,排除三氟乙酸的干扰。
2、使用100%乙腈作为流动相,乙腈作为样品进样,如果为基线,则说明色谱柱及系统完好。
3、然后在换流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水,样品为乙腈,如果有上述“中间位置出现较大的色谱峰”,那说明八成问题在三氟乙酸上,或者稀释三氟乙酸的水上。
4、如果上述2、3都有“中间位置出现较大的色谱峰”,检查检测器及进样器。
5、这些还不能解决,请联系工程师。
空白乙腈出峰
Q:高效液相色谱仪,进空白乙腈,在样品峰位子出现倒峰,进双蒸水在样品峰出现正峰,进样品时有杂峰干扰,我已经排除了水和乙腈的问题,不知道是不是进样池或者检测器污染了,已经整了10多天,还是没效果,请指教原因和解决办法。
A:液相中出现倒峰,主要原因是样品吸收比流动相吸收小,所以排除影响,不仅要考虑进样系统污染和检测池污染,还要考虑流动相和色谱柱的影响。换一根柱子试试,考察系统的情况,如果照旧,就排除色谱柱的影响,然后更换流动相试试,再以后清洗进样系统和检测池等等。
或将色谱柱从系统中断开,直接用乙腈或水做流动相清洗检测器就可以知道是否是检测器受污染,如果基线正常,再检查你的进样系统,样品,前处理是否有问题,如果都没问题,就去检查色谱柱吧。
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