【网络讲堂问答集锦】《无菌工艺模拟试验指南》要点解读

培养基的限度要求

实际生产时对原料药的无菌是有控制的，但是实际培养基买来后含菌量很高，采用除菌过滤后出现阳性，不能确认是哪方面的问题，并且与生产差距较大，没有代表意义吧？

无菌制剂用原辅料微生物限度怎么制定？终端灭菌与过滤除菌原辅料微生物限度标准是否一致？

我公司是一边无菌过滤，一边灌装。这种情况如何控制配制好未灭菌培养基的微生物污染？

在网络讲堂中提到，实际生产过程原辅料微生物限度可根据除菌过滤技术及应用指南等法规资料。无菌工艺模拟时采用除菌过滤，主要目的是模拟相关的无菌操作或给培养基除菌，而不是挑战过滤器的除菌性能，故不必要对培养基微生物限度做要求。

当除菌过滤后出现阳性，需要进行偏差调查。可采用预过滤降低生物负载和滤芯堵塞，或采用无菌干粉培养基，通过低负载或无菌培养基减小无菌生产线的污染风险。

支原体风险

支原体污染的去除是如何满足的？

如何预防支原体污染呢？

支原体体积为0.1～0.3 um或更小，0.2 μm过滤器不可过滤， 0.1 μm可部分截留。无细胞壁，不能合成多糖，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感，易于存活。新陈代谢缓慢，在固体培养基表面呈特有的“油煎蛋”状，无菌检查培养无法检出，10⁷ – 10⁸ cfu/mL的高浓度时无PH改变，不浑浊。

可通过湿热灭菌及辐照灭菌的方式去除支原体，如条件允许可对培养基进行相关的支原体检测。

培养基种类的选择

工艺验证模拟介质培养基时需要TSB和FTM共同完成验证，可以选择其中一种吗？比如TSB。

FTM的一般滤过压力是多少？

液体模拟培养基的选择必须是TSB吗？

若原使用动物源的TSB，换成植物源的TSB，是否需重新进行三批无菌模拟灌装实验，还是仅按正常的半年一次的频次进行？

参照指南描述，胰酪大豆胨液体培养基（TSB）是一种广谱性培养基，特别对无菌工艺环境中源自人体的细菌、芽孢和真菌有良好的促生长效果，是无菌工艺模拟试验常用的培养基。

如果产品需充入惰性气体、储存在无氧条件，无菌操作在严格的厌氧环境中进行时（即氧气浓度低于0.1%），应考虑采用厌氧培养基，如硫乙醇酸盐液体培养基（FTM）或其它适宜的培养基。在厌氧的无菌工艺环境监控中反复发现厌氧微生物或在产品无菌检查中发现厌氧微生物时，需评估增加厌氧培养基。

针对植物源性培养基，可通过验证数据证实其生长性能与TSB无差异。

培养基性能确认

促生长实验中已经对TSB进行了枯、白、黑的检验为什么还有单独对枯草和白念再进行20到25度7天的实验？

模拟介质的浓度多少（培养基 模拟介质 菌液）？

模拟灌装使用的质控菌要包含厌氧菌吗？

对模拟灌装的培养基促生长试验中有必要测定环境菌吗？

模拟试验需要进行病毒、支原体的检测吗？还是只进行无菌检测就可以了？

指南建议模拟灌装的培养基促生长试验中测定环境菌。

针对培养基灵敏度检查参考中国药典相关要求，总结如下表：

由于灵敏度试验接种菌株的数量大，生长能力良好，为考察培养基性能，可考虑接种低菌量的菌种考察培养基的生长性能。由于在实验室低菌量菌液制备较困难，并不是强制要求，可由培养基供应商提供相关数据。

偶发干预模拟

偶发停电的情况应该结合设备系统的设计，如果这种停电的机制是一致的且造成的风险可控才可以进行模拟，否则是无任何实际意义？

无菌工艺模拟试验不是验证，在模拟试验中的停电时长成功后并不意味着实际生产产品小于该时长时都可放行。极端情况下如瞬间停电，需要考虑环境风险，压差保持，倒灌风险，采用的环境保持设备的具体情况等。偶发性干预选择与否应根据采取的应对措施，停电后是否继续生产，收集突发事件相关的数据。

例如在停电后选择抛弃产品可以不进行模拟，但如果瞬间停电以后通过测试恢复时间，亦证实来电以后多久可以继续生产。依然计划保留密闭的产品，可通过模拟试验考察停电阶段（恢复之前）的情况。所以偶发性干预模拟的程度应根据企业情况评估后决定。

•  经过严格的灭菌验证

•  三层包装防止气体渗透

•  直接无菌连接至生产管路或系统

•  可根据需求定制