仅需一步，得到符合标准的无微生物纯水

实验室纯水中的污染物常见的有颗粒、离子、有机物、微生物和气体，其中微生物污染与其他污染有显著区别。

首先是微生物是具有生命力的，去除水中微生物后过一段时间，微生物数量可能恢复至原来的数量甚至更多，而其他各种污染物在经过过滤和去除后，是不会自动生成或增加的。

纯水中常见的新月柄杆菌

By Adenosine (Made with Adobe Illustrator CS6) [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], via Wikimedia Commons

其次，水中的细菌通常经过低营养度、氯化物消杀等严酷的环境考验，其生命力变得非常强。

再者水纯化系统中，起抑菌作用的氯化物必须要先去除，因为氯化物本身是污染物，而且对过滤膜都有腐蚀作用。经过这个环节后，纯水生产的过程没有强烈的化学抑菌手段。

在纯水系统尤其是自动化分析仪器内部管道系统中，其温热的环境更促进了细菌的生长。时间稍长，即能够形成多种微生物复合组成、带有自我保护功能、而且极难去除干净的菌膜。

纯水中常见的少动鞘氨醇单胞菌

via http://microbe-canvas.com

总之，微生物污染是影响最复杂，最难控制的，也是被严重忽视的。

对于临床实验室纯水微生物取样培养，推荐采用薄膜过滤法，并使用适合纯水环境微生物生长的低营养R2A培养基进行培养，推荐培养五天。

纯水微生物检测步骤较为复杂且费时，而选用Millipak / Millipak Gold终端精制器与POD取水器连接，定期更换Millipak过滤器即可以提供无菌、无颗粒的超纯水(Millipak 0.01 CFU/mL, Millipak Gold 0.005 CFU/mL)，符合您的特定研究和应用要求。

新终端精制器POD-Paks特点

符合人体工程学的锁扣和保护罩，可实现轻松的“卡入式”安装。

e-Sure标签，用于溯源必需的数据。

通过e-Sure标签，可在屏幕上监控所有耗材状态。耗材的所有数据和事件都将被自动记录在系统中。

提示：如果您需要多种类型的超纯水，可在您的系统上最多连接四个Q-POD取水手臂，每个配有不同的终端精制器。

以下是临床实验室纯水微生物检测的具体步骤

样品采集

样本采集前准备

确认是否需要无菌管路—准备容量>5 L的容器（如水箱采样，确保水箱有足够的水）—穿洁净实验服—使用无菌手套并用酒精消毒；

采样

水机水箱后纯水出水口样品采集

根据水系统使用手册，使水系统保持在正常使用状态；

使用消毒酒精清洁采样口表面；

在允许的条件下尽量避免连接管路，或尽量使用无菌管路。如均不适用则选用日常水系统自带管路；

采样口冲洗（依据Merck纯水实验室数据，利用纯水机器产水直接冲洗采样口，冲洗量达5 L可最大限度消除采样口原有粘附细菌影响）；

冲洗后勿关闭开关，打开采样无菌容器盖子，进行采样（取样量推荐250 mL）；

采样后无菌容器立即拧紧盖子，贴上样品标签；

关闭水系统管路开关。

水机接入生化仪/免疫分析仪进水点样品采集

根据水系统使用手册，使水系统保持在正常使用状态；

使用消毒酒精清洁采样口表面；

冲洗采样点管路，将收集容器放置在采样点备用；

冲洗约1 L水左右，留取水样。冲洗后请勿关闭开关，否则需要重新冲洗；

打开采样用无菌容器的盖子；

从水系统管路采样至无菌容器，采样量30 mL。请勿过量，请勿将水系统出水口管路接触无菌容器或水表面；

采样后无菌容器立即拧紧盖子；

关闭水系统管路开关；

贴上样品标签。

分析仪内水箱样品采集/外接桶装水样品采集

去掉水箱的盖子；

拿出无菌移液管；

确认水箱没有被打开或者损坏，避免外部的污染；

打开无菌移液管包装前，确认袋子没有被打开过；

打开袋子，取出无菌移液管。不要让移液管下端接触任何表面；

用无菌移液管吸取样品约30 mL，然后将样品移至无菌容器；

采样后无菌容器立即拧紧盖子；

关闭水系统管路开关；

贴上样品标签。

采样后处理

尽快分析样品，如不能采样后立即分析，将采样后的无菌容器按照样品储存与运输段落描述的要求储存，避免样品失效。

样品的储存与运输

如果水样需储存，室温下最多2小时或2-8°C最多48小时（建议24小时之内）

样品运输途中使用隔热运输包装送至样品分析处

培养基及培养条件

过滤薄膜

亲水性混合纤维素材质，CLSI C3-A4推荐使用孔径0.22 μm的滤膜。

经Merck纯水实验室基于试验推荐使用孔径0.45 μm的滤膜。

培养基

R2A培养基（低营养琼脂培养基）。

使用两种不同的培养基R2A和TSA对纯水中的微生物进行培养，水样分别放在10个培养皿（每种培养基5个）中进行培养。

结果如下：

培养条件

CLSI C3-A4推荐培养温度为20～28℃，培养至少5天（CLSI C3-A4）；经Merck纯水实验室经过试验摸索，推荐培养温度30℃，培养5天，可在最短时间内获得一致性较好的结果。

薄膜过滤法

推荐用于水样微生物数量小于10 CFU/mL，检测的水样体积应该根据实际情况进行评估，最终孵育结果可计数（例如滤膜不能过度拥挤）。样品通过无菌滤膜过滤，细菌截留在滤膜上，滤膜贴在R2A培养基上并培养，R2A培养基的营养物质吸附在薄膜上供菌落生长。具体操作如下：

将无菌滤膜、无菌滤杯分别放置在Milliflex泵头上；

加50 mL无菌纯化水润湿滤膜；

适当摇动样品使其均匀，打开盖子，移取1mL水样至无菌滤器中（样本量取决于微生物含量，以确保滤膜微生物生长不会过密）；

开泵将样品经滤膜过滤后关闭泵；

加约30 mL 无菌水冲洗滤杯内壁，打开泵将无菌水通过滤膜；

使用无菌平头镊子，小心地夹取薄膜边缘；

将滤膜网格面朝上小心的放置于培养基表面，避免薄膜与培养基间的气泡；

在平皿上记录标签信息。

样品培养及观察计数

培养以后菌落按照CFU/mL计数并记录。

多于200 CFU/皿，可能会造成菌落抑制且不易计数，如无法计数时可记录为多不可计。