2020-07-12 17:38:20, 徕卡显微 徕卡显微系统(上海)贸易有限公司
徕卡THUNDER系统展现了一种全新的成像方式,高分辨,快速度,低光毒,易操作!随着对各种生命标本的深入研究,厚组织,类器官,细胞3D培养,甚至模式生物成像都离不开Z-stack的使用。Z-stack其实是Z轴三维层切成像,Z-stack成像后可以很方便地观察标本每个层面的结构,进行三维结构重构,甚至进行三维测量分析等。
下面为大家介绍Z-stack拍摄究竟是如何操作的。
进行Z stack拍摄,首先需要在软件左上方“Acquisition Mode”中选中xyz模式,此时会出现“Z-Stack”下拉选框。多通道拍摄光路设置跟前面一样,然后在某一个通道下面
此时可通过调焦旋钮调节不同焦面设置焦面范围进行三维断层扫描。
例如,可先调整到焦面,然后先向一边调节至标本虚焦,
然后再反向调节调焦旋钮,经过最佳聚焦面直至到标本再次虚焦,设置为end,设定好之后可以看到当前我设定的Z-stack的厚度为10.97微米。
那么这里系统结合硬件参数推荐的是每隔0.5微米拍摄一张图片,总共拍摄23张。另外,我们也可以更改其中的数值,自己定义Z-step size的大小。
同样的,多通道光路和曝光时间设定完成后,我们需要选择THUNDER方法。
那么对于厚组织样品我们选择LVCC方法。
这样全部设定完成后,
我们可通过拉动右边的Z-stack拉条来查看不同焦面的图像。
同样的,我们可
下图普通宽场的一个效果。
那下面这个是THUNDER的图像,可以看到图像清晰锐利,具有更高的对比度与信噪比。
好啦,这样我们的三维立体图像就拍摄完成啦。
对于得到的图像如何查看并进行测量分析呢?
下一期为您详细介绍。
往期回顾
手把手教你用THUNDER——多通道拍摄篇
手把手教你用THUNDER——时间序列拍摄篇
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