技术控 | 方法开发中调整流动相技巧篇（内含福利）

■对于反相色谱，分析物应该维持中性

■对酸性或碱性化合物，将流动相pH维持在高于或低于分析物pK_a的两个pH单位值

■为了延长色谱柱寿命，使用浓度小于20mM的缓冲液

■保持在所用缓冲液所给予的缓冲范围内进行操作

除了有机溶剂外，缓冲液的选择是HPLC方法开发中重要的参数。选择合适的缓冲液有几个标准。首先是选择拥有和操作环境pH相似pK_a的缓冲液。其它的标准，比如离子强度、离子对性质和质谱的相容性，也应该在选择流动相改性剂前考虑。

资料来源：: Practical HPLC Method Development; L.R. Snyder, JJ Kirkland, and JL Glajch. Wiley Interscience, 1997, and Introduction to Protein and Peptide HPLC; TP Bradshaw, Phenomenex, 1998.

† 常用缓冲液为粗体

‡ 低浓度三氟乙酸可以使用于LC/MS应用，但有可能影响灵敏度。

下面是一组通过不同PH缓冲液对酸碱化合物的色谱分离效果实例

色谱柱

Gemini 5μm NX-C18

规格

150 x 4.6mm

货号

 00F-4454-E0

流动相

请参见色谱图

梯度

在10分钟内，由A/B(95:5)至(5:95), 并维持2分钟

流速

1.5mL/分钟

温度

室温

检测

UV@254nm

样品：

1.阿米替林

2.萘普生

3.甲苯

通过以上这个案例，我们可以看到流动相PH调整直接影响着不同酸碱性组分的保留和出峰时间。

这里我们也特别为您筛选了一款PH值方法开发包：

实验享不停，下单享惊喜！

■以上方法包涉及色谱柱长度，粒径不限；

■色谱柱内径ID限制为2.0, 2.1, 3.0, 4.6；

■优惠不适用于内径≥7.8mm的液相色谱柱以及散装填料；

■单笔订单中只能包含其中一种活动方法包；每个方法包必须按照指定产品下单，不能拆包购买；

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 2020年4月27日-5月29日

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