2018-11-10 12:36:42 赛默飞色谱与质谱分析
又到周五啦!四小名助如约而至,给大家带来色谱耗材相关的实用技术小贴士。内容涉及色谱柱及前处理产品选择、使用、维护保养等内容。实用干货,不容错过!
温海燕
赛默飞资深应用工程师
新课堂 Classroom
维生素 A(retinol)、维生素 D(vitamin D2 和 vitamin D3)、维生素E(tocopherol)是机体维持正常代谢和机能的所必需的脂溶性维生素。其中维生素 E 有 8 种异构体形式,即4 种生育酚(α、β、γ、δ-tocopherols)和 4 种三烯生育酚(α、β、γ、δ-tocotrienols),均具有重要的生物活性,被认为是一类主要的抗氧化剂。通常α-生育酚被报道是活性最高的一种维生素E 形式,因此很多文献报道的分析方法仅测定了α-生育酚的含量。最近研究表明,其他几种异构体形式也在人体中具有重要的作用,并且γ-生育酚具有抗癌作用。维生素E 异构体结构的复杂性和活性的差异,决定了建立一种准确可靠的分析方法,来分离和测定食品基质中各个异构体含量,具有重要意义。如何进行食品中维生素A、D、E的测定呢?跟着我们小名助一起做实验吧!
新版国标GB5009.82-2016对维生素E的四种异构体的分析提出了要求。而常规C18色谱柱很难将其实现基线分离。另外维生素 D 也是婴幼儿配方食品中一种重要的营养素,在用常规反相C18分析D2 和D3 异构体的时候经常遇到分离度差的问题。
本文建立了同时测定食品中D和E含量的液相色谱法,可实现对维生素E的四种异构体和D2和D3两种异构体的分析及准确定量。
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样品前处理
取维生素 D2、D3 和E 标准品适量,精密称定,至25 mL 量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,制成浓度分别为 1.0 mg/mL 维生素 D3 和 D2 溶液和 2.06 mg/mL 维生素 E 储备溶液。
分别精密量取维生素 D3 和 E 的标准品溶液适量,至 10 mL 棕色量瓶中,配制成混合溶液,再分别精密加入等量的浓度为 10 μg/mL 的维生素 D2 的内标溶液,甲醇稀释至刻度,分别得到浓度为:ɑ-VE:2.4μg/ml,ß-VE:2μg/ml,γ-VE:1.6μg/ml、δ-VE:2.4μg/ml, D3: 0.08μg/ml.
仪器方法
四种维生素E异构体分析的色谱条件:
方法一
色谱柱:Acclaim C30
4.6×250 mm,5 μm(货号:075718)
流动相:甲醇-水
流速:0.8mL/min
检测器:紫外,296nm
柱温:20℃
进样量:10μL
仪器:Ultimate 3000
图1 四种维生素E的实验图谱:Acclaim C30
方法二
色谱柱:Accucore PFP
3.0×150 mm,2.6 μm(货号:17426-153030)
或 GOLD PFP 4.6×250 mm,5 μm(货号:25405-254630)
流动相:甲醇-水
流速:0.6mL/min (Accucore PFP), 1ml/min(GOLD PFP)
检测器:紫外,296nm
柱温:20℃
进样量:10μL
仪器:Ultimate 3000
图2 四种维生素E的实验图谱:Accucore PFP
图3 四种维生素E的实验谱图:GOLD PFP
两种维生素D异构体分析的色谱条件:
色谱柱:Hypersil Green PAH
4.6×150 mm,3 μm(货号:31103-154630)
流动相:乙腈:甲醇=60:40
流速:1mL/min
检测器:紫外,264nm
柱温:35℃
进样量:10μL
仪器:Ultimate 3000
图4 两种维生素D异构体的实验图谱
结论
采用赛默飞公司Acclaim C30,Accucore PFP,GOLD PFP及Hypersil Green PAH 色谱柱可按照国标GB 5009.82-2016条件对维生素ADE进行分析,并对各化合物有较好的保留和分离。
应用编号:CCS-SP-167
如想了解更多产品信息
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