奶牛隐性乳房炎的检测方法的应用进展

        乳房炎是对奶牛养殖业危害最严重的疾病之一，特别是隐性乳房炎，由于没有明显的临床症状，不仅会导致奶牛乳产量和质量的降低，而且还可能传染给其他奶牛，导致疾病的扩散。因此，对隐性乳房炎进行监测是奶牛场最重要的工作之一，由于患隐性乳房炎的奶牛没有明显的临床症状，因此只有运用各种方法对乳汁进行检测，通过有关生理、生化等指标的变化来判断和评价乳房炎的发生情况。

临床乳房炎牛奶图片，可以肉眼看到牛奶状态发生很大改变。

亚临床乳房炎牛奶照片，肉眼无法分别，需要借助其他检测方法：

       应用于奶牛隐性乳房炎检测的方法有多种，主要有细胞学检查、酶学指标检测、应激蛋白检测和物理性质检测等。近几年，随着检测技术的不断改进，新的检测隐性乳房炎的方法也层出不群。

1 细胞学检查

    根据乳汁中体细胞数含量的多少来判断是否患有隐性乳房炎，是一种比较可靠的方法，目前在临床上应用的比例较高，常用的有乳汁体细胞直接计数法和间接计数法两种。

    直接计数法就是通过直接计算每毫升牛乳中细胞数量的方法来评价奶牛的乳房炎发病情况。如直接显微镜计数法(DMSCC)，该方法检测成本低，但因操作人员经验水平和所处环境条件的不同，导致数据结果误差较大，且耗时长，不易掌握，不适合大批量快速检测。目前较先进的是采用荧光流式细胞技术对牛奶中的体细胞进行荧光染色处理的自动计数法。优点是快速、准确、误差小、重复性好，电脑自动计数并打印结果，目前已经有商业的仪器出售，该方法的缺点是需要专门的仪器设备，对于一些规模较小的养殖场(户)会增加成本。此外，虽然各个国家对体细胞计数法比较重视，但是有关的规定和标准却不尽相同，一般在200000~500000个／毫升以内为安全。

    间接计数法比较著名的是加州乳房炎测试法(CMT)，其原理是将乳汁中的细胞破坏后，根据释放出的DNA沉淀或凝块的数量间接判断细胞数目多少的方法。据此原理还衍生出了Wisonsin乳房炎测试法(WMT)、Michigan乳房炎测试法(MMT)、兰州乳房炎测试法(LMT)等等改进方法。此外还有应用表面活性剂配方制成的SMT系列诊断液。总体来说，这一类方法操作简单，诊断迅速，成本较低，但缺点是结果判定的主观性较强，容易出现主观误差。

2 微生物学检测

    对乳汁的病原微生物进行分离培养和鉴定，并与患牛的临床症状和乳汁的性状结合起来，判定乳房炎的发生情况。如在乳汁中分离到无乳链球菌、金黄葡萄球菌、大肠杆菌或霉形体时，就要注意这些病原可能与牛群的乳房炎发生有关系。但需要指出的是，有些隐性乳房炎不能在乳汁中检出病原菌，而有些病原菌经常存在于乳房内，检出时牛只不一定发病。因此根据乳汁中有无病原菌来判断奶牛是否患有乳房炎需要综合分析。

3 乳汁理化性质的检测

3．1乳汁ＰH值检查法

    研究证实当发生乳房炎时，乳汁的PH值升高，升高的程度取决与炎症的程度。因此通过检测乳汁ＰH值的方法可以检测乳房炎。常用的方法有溴麝香草酚蓝试验(BTB)法和乳房炎试纸法。

3．2乳汁导电性检查法

    当奶牛发生乳房炎是，其乳汁中的离子浓度升高，进而表现为导电性的增加，因此，通过检测牛奶导电性的变化可以用于乳房炎的诊断。但不同的个体及不同的饲养管理状况，乳汁电导率变化较大，因此判断隐性乳房炎的关键是确定不同牛群正常乳汁的阈值。目前国内外有很多基于这一原理的奶牛乳房炎电子诊断仪，实现对奶牛乳房炎及牛奶形状的快速、综合检查。

4. 几种新的隐性乳房炎的检测方法

第一种:PCR方法:多达16种不同的引起乳腺炎的病原体可使用PCR（聚合酶链式反应）检测进行分析。然而，PCR检测需要花费5小时，解析检测结果也比较困难，例如，由于污染引起的假阳性结果。这一检测对于奶牛来说价格也相对较高（每头奶牛大致花费15-20欧元）。

第二种检测方法为乳铁蛋白（一种糖蛋白）（Lactoferrin）。它是哺乳动物免疫系统中一种组分，自然存在于牛奶中。这个参数可以使用傅里叶技术进行预测，例如使用Milko­scan分析仪，可以进行等成本的分析，或使用昂贵的酶联免疫反应（ELISA）分析。然而，文献中报道采用乳铁蛋白含量用来筛查乳腺炎一直存在争议，其认为乳铁蛋白含量变化仅存在于临床性乳腺炎中。乳铁蛋白的价值仍然不清楚。

第三，牛奶淀粉样蛋白（MAA）,一种脂蛋白在免疫系统中具有多种功能，已经被认定为筛查乳腺炎的指示剂。这种蛋白仅能使用专用ELISA进行检测，这需要更多的劳动和花费，需要DHI样品不进入日常工作样品流，而专门用于实验室检测用。除此之外，牛奶淀粉样蛋白（MAA）仅能在季度初乳中检测，这就给奶农增加了额外的工作。对DHI样品需要做进一步的研究。

总之，体细胞计数被认定为最终的参数用于乳腺炎的筛查。然而，仍然需要使用生物标记，提高乳腺炎筛查的准确性（例如，疾病初期的诊断），并且检测DHI样品会有较低的费用。