2019-09-10 16:40:33 北京莱伯泰科仪器股份有限公司
前言
4,4''-二氨基联苯俗称“联苯胺”,分子式为(C6H4NH2)₂,系联苯的衍生物之一,为IARC第一类致癌物,有强烈的致癌作用,是染料合成的中间体,在染色的棉纺织品中容易超标。
联苯胺是重要的染料中间体,联苯及其衍生物广泛用于各种染料合成,其种类多达250种。4,4''-二氨基联苯及其盐都是有毒且会致癌的物质,进入体内,引起皮炎,刺激黏膜,损害肝和肾脏,且会造成膀胱癌和胰腺癌 。联苯胺的浓度只要达到6.7ppb,对人体就有致癌的风险,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考,4,4''-二氨基联苯(联苯胺)在一类致癌物清单中,因此,建立一套快速处理、富集水中联苯胺并检测的方法是非常有必要的。本文使用SPE-1000全自动固相萃取系统对水中联苯胺进行固相萃取富集,用高效液相色谱仪进行检测。
本文参考“HJ 1014-2019 水质联苯胺的测定高效液相色谱法”采用SPE1000配置两种不同类型的固相萃取柱,测试其对联苯胺的回收效果,经过实验, SCX固相萃取柱的回收率在78.7%~94.2%之间,重现性RSD在2.0%~6.4%之间;HLB固相萃取柱的回收率在81.0%~91.9%之间,重现性RSD为6.0%。两种萃取柱均得到较好的回收率和良好的重现性,说明SPE-1000全自动固相萃取系统可靠稳定,适用于大体积水中的联苯胺样品前处理
1、SCX萃取柱实验过程
1.1仪器与试剂
SPE-1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);
LC600高压高效液相色谱仪(莱伯泰科公司);
联苯胺,>99.5%,远航试剂厂;
甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);甲酸(分析纯);乙酸(分析纯);
SCX固相萃取柱(500 mg/3 mL莱伯泰科)
自来水;超纯水。
1.2混合标准工作液的配制取一定量的联苯胺标品于10 mL容量瓶中,用甲醇定容,浓度为1000 μg/mL,用甲醇稀释成1 μg/mL标准工作液,用甲醇水溶液(V:V=1:1)依次配置成浓度分别为5μg/L、 10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L的混合标准工作液。1.3实验方法
1.3.1样品制备
取150 mL水样,加入8 mg硫代硫酸钠,超声10 min,用盐酸或者氢氧化钠将水样调至PH=5-6(蒸馏水无需调节PH),在分别加入60 μL、150 μL的标准工作液,使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为0.40 μg/L,将样品混匀待处理。
1.3.2固相萃取及浓缩按照图1所示的方法进行SPE-1000方法编辑,并加载方法到相应通道,进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中,进行30℃氮吹至1 mL,水定容至2 mL,待检测。
图1 水中联苯胺的SPE富集方法1.3.3 HPLC测定水中联苯胺
色谱柱: C18,5 μm,4.6 mm*150 mm;
波长:激发波长:292 nm,检测波长395 nm;
流速:1.0 mL/min;
进样量:20 μL;
流动相:乙酸铵:乙腈=85:15(0.05%甲酸)
2、实验结果
2.1 水中联苯胺色谱图2.1.1水中联苯胺标品色谱图
图2为取30 μL的混合标准工作液用甲醇:水(1:1)定容到1.0 mL检测,联苯胺标品出峰色谱图,出峰时间分别为6.1 min。
图2 联苯胺标品出峰色谱图
2.1.2水中联苯胺加标样品色谱图
图3联苯胺加标样品出峰色谱图,出峰时间为6.1 min,
图3联苯胺加标样品出峰色谱2.2 联苯胺线性
联苯胺线性如下图4。
图4联苯胺线性图
2.3 HPLC测定水中联苯胺回收率
HPLC测定蒸馏水中联苯胺回收率计算结果如下表,萃取富集后的回收率均在78.7%~83.0%之间,重现性RSD为2.0%。
表1 蒸馏水中联苯胺的加标回收率(加标浓度0.4 μg/L)
HPLC测定自来水中联苯胺回收率计算结果如下表,萃取富集后的回收率均在79.4%~94.2%之间,重现性RSD在6.4%。
表2 自来水中联苯胺的加标回收率(加标浓度0.4 μg/L)
3、 HLB萃取柱试验过程
3.1仪器与试剂
SPE-1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);
LC600高压高效液相色谱仪(莱伯泰科公司);
联苯胺,>99.5%,远航试剂厂;
甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);甲酸(分析纯);乙酸(分析纯);
HLB固相萃取柱(500 mg/6 mL沃特世)
自来水,超纯水。
3.2标准工作液的配制
取一定量的联苯胺标品于10 mL容量瓶中,用甲醇定容,浓度为1000 μg/mL,用甲醇稀释成1 μg/mL标准工作液,用甲醇水溶液(V:V=1:1)依次配置成浓度为30 μg/L的混合标准工作液。
3.3试验方法
3.3.1样品准备
取150 mL自来水样品,加入8 mg硫代硫酸钠,超声10 min,用盐酸或者氢氧化钠将水样调至PH=6~9,在分别加入60 μL的标准工作液,使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为0.40 μg/L,将样品混匀待处理。
3.3.2固相萃取及浓缩
按照图5所示的方法进行SPE-1000方法编辑,并加载方法到相应通道,进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中,进行32℃氮吹至1 mL,水定容至2 mL,待检测。
图5 水中联苯胺的SPE富集方法
3.3.3HPLC测定水中联苯胺
色谱柱: C18,5 μm,4.6 mm*150 mm;
波长:激发波长:292 nm,检测波长395 nm;
流速:1.0 mL/min;
进样量:20 μL;
流动相:乙酸铵:乙腈=85:15(0.05%甲酸)
4、实验结果
4.1水中联苯胺色谱图
4.1.1水中联苯胺标品色谱图
图6为取30 μL的混合标准工作液用甲醇:水(1:1)定容到1.0 mL检测,联苯胺标品出峰色谱图,出峰时间分别为6.6min。
图6 联苯胺标品出峰色谱图
4.1.2水中联苯胺加标样品色谱图
图7联苯胺加标样品出峰色谱图,出峰时间为6.6min,
图7联苯胺加标样品出峰色谱图
4.2 HPLC测定水中联苯胺回收率
HPLC测定自来水中联苯胺回收率计算结果如下表,萃取富集后的回收率均在81.0%~91.9%之间,重现性RSD为6.0%之间。
表1 自来水中联苯胺的加标回收率(加标浓度0.4 μg/L)
5、实验结果与讨论
1 从实验效果上来看,两种萃取柱均满足实验要求,可任意选择其中一种;
2 联苯胺属于二元弱碱,在使用阳离子交换柱时,将样品PH调至弱酸性,有利于固相萃取柱对于目标物的吸附;
3 SPE-1000处理水样,回收率好、稳定性高,适宜处理大体积水样;
4 SPE-1000自动在线富集方便快捷,极大节省了实验成本。
5 乙酸铵和乙腈体系的流动相,保留时间过短,容易产生杂质干扰,流动相中引入酸,既可以增大目标物的响应,又能延长目标物的保留时间。
参考文献
固相萃取-高效液相色谱法测地表水中的联苯胺
饮用水源中痕量联苯胺的检测方法
HJ 1014-2019 水质联苯胺的测定高效液相色谱法
07-01 英斯特朗
连载 | 药物一致性评价与粒度分析(三)07-01 欧美克仪器
【仪器百科】LS-909丨干湿二合一激光粒度分析仪07-01 欧美克仪器
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