高效液相色谱法测定铁皮石斛中的甘露糖

LC-5510型高效液相色谱仪

甘露糖对照品、葡萄糖对照品、盐酸氨基葡萄糖、PMP、甲醇（优级纯）、氢氧化钠、盐酸（优级纯）、三氯甲烷、乙醇（优级纯）、乙腈（色谱纯）、乙酸铵（优级纯）。

北京东西分析仪器有限公司LC5510高效液相色谱仪及在线脱气机离心机、索氏提取器、水浴锅、超声清洗器等。

色谱条件

色谱柱：EWAI C18-2 柱

缓冲液：0.02mol/L乙酸铵溶液

流动相：乙腈：缓冲液=20：80

流速：1.0ml/min；进样量20μL；柱温：室温；检测波长：250nm

校正因子计算

取盐酸氨基葡萄糖适量，配置成1ml含12mg的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品置量瓶中，加入内标溶液,加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取适量，分别加入PMP甲醇溶液与氢氧化钠溶液适量，混匀，水浴反应。再加盐酸溶液混匀，用三氯甲烷洗涤，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液,注入液相色谱仪，测定，计算校正因子。

样品制备与测定

取本品粉末0.1219g,置索氏提取器中，乙醇加热回流提取，弃去乙醇液，药淹挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水，再加入内标溶液，搅拌下煎煮小时，室温加水补至约100ml,混匀，离心，吸取上清液，置顶空瓶中，加盐酸溶液，封口，混匀，水解，放冷，用氢氧化钠溶液调节pH值至中性，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得。

对谱图进行积分，输入内标物含量及甘露糖含量，由LC5510操作软件直接获取校正因子见下表:

对谱图进行积分，输入内标物含量及甘露糖含量，由LC5510操作软件直接获取甘露糖浓度见下表:

经计算该铁皮石斛样品中甘露糖的含量为18.61%，符合《中国药典》2015第一部“按干燥品计算，含甘露糖（CHO）应为（13.0~38.0）%”的要求。

高效液相色谱法以其较高的灵敏度与优异的重复性在制药行业被越来越多的使用。利用LC5510高效液相色谱仪分析铁皮石斛中甘露糖，谱图基线漂移小，色谱峰峰型良好，理论塔板数按甘露糖峰计算为13378完全符合《中国药典》2015第一部要求，体现出LC5510高效液相色谱仪作为分析复杂样品有力工具的优越性。