【徕卡学院】小身材，大能耐——论“物镜校正环调节”对显微成像的影响

但是市面上的盖玻片耗材多种多样，厚薄不一（见表1）。除此之外，在倒置显微镜上，经常会使用诸如培养皿、多孔板等各种不同类型的耗材，有些器皿的底部厚度甚至达到了1-2mm。此时，必须使用带有校正环功能的物镜来进行成像。

表1、MatTek公司不同号码盖玻片及其对应的实际厚度

在倒置显微镜中，经常需要配置长工作距离物镜，因为长工作距离物镜不仅能用于载玻片观察，还能兼容不同底部厚度的器皿，进行活细胞观察。在长工作距离物镜上，我们经常会发现有一圈能左右转动的校正环（图1）。针对不同厚度的耗材，我们需要将校正环调节到不同位置。

图1、带校正环的20倍和63倍物镜。英文简写CORR代表此物镜带有校环，校正环可以左右转动，将环上的小点位置调节至当前使用盖玻片或器皿底部的厚度处。

别小看了这个校正环，它对显微成像会产生很大的影响。我们使用0.17mm盖玻片的样品进行了相应测试。明场成像时，如果校正环调节位置不对，成像清晰度会严重下降，而且是无法通过镜体调焦旋钮来改善的（图2）。在对荧光成像时，校正环设置不准确，除了清晰度下降以外，荧光的亮度也会发生大幅下降（图3）。因此，大家在倒置显微镜上观察时，记得要确认一下物镜是否带有校正环，校正环的位置调节是否正确。

图2、肾脏病理切片的明场成像。成像物镜为带校正环的40倍物镜，校正环位置分别为0（左上），0.17（右上），1.0（左下），2.0mm（右下）。

图3、Mito-TrackerRed标记的线粒体荧光成像。成像物镜为带校正环的63倍物镜，校正环位置分别为0.3（上），0. 7（中），0.17 mm（下）。

但是，倒置显微镜在物镜转盘处的操作空间狭小，对于手指粗壮的男同胞来说，伸手进去调节校正环稍显麻烦。特别是在搭载了双荧光光路和孵育箱的活细胞工作站上（图4），手动调节校正环会变得更加吃力。

图4、搭载双荧光光路的DMi8活细胞工作站（上图配置的为培养小室，下图配置的为大型孵育箱）

一直以来，徕卡将人性化设计贯穿于所有产品之中。针对倒置显微镜物镜转盘处操作空间狭小，手动调节校正环困难的问题，徕卡推出了独家设计的motCORR物镜，可通过外部旋钮和LAS X成像软件，即可对物镜校正环进行全电动调节（图5）。

图5、徕卡motCORR物镜（左），可通过外部旋钮（右下）和LAS X成像软件（右上）进行物镜校正环全电动调节。

尤其是在一些高端成像方式中，经常需要对物镜的校正环进行调节（图6）。motCORR能提供比手动调节更可靠的参数设置，而且更具有可重复性。

图6、徕卡motCORR物镜非常适用的三大应用方向：FCS（左）、多光子（中）和活细胞（右）成像。

如在FCS（Fluorescence Correlation Spectroscopy，荧光相关光谱）成像时，通过motCORR可轻松将共聚焦激发体积调节接近至数学模型，从而得出更加准确的FCS分析结果。其次，在做活体厚组织红外多光子成像时，由于组织内部的折射率不均一，会导致结构扭曲，荧光亮度大幅下降，通过motCORR对样品折射率的校正，以获得亮度和对比度更高的组织深部荧光图像，达到更大的穿透深度。此外，motCORR可与高数值孔径的水镜、水镜自动加水微泵和AFC（adaptivefocus control）自适应稳焦系统全面兼容，轻松实现完美活细胞成像。

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