高质量RNA精准分选如何实现？——汪艳教授团队徕卡激光显微切割(LMD)应用经验分享

1.用去除RNase试剂擦拭实验台面与仪器表面。

2.开启LMD控制器，等待显微镜完成初始化。

3.拧动激光器钥匙至开机档位，启动LMD激光系统。激光预热10分钟。

4.打开电脑及LMD软件，等待软件初始化结束。

5.将0.2mL PCR管装入收集装置。

6.在PCR管盖中加入10μL RNA提取缓冲液（RNeasy FFPE 试剂盒配套试剂）。

7.将收集装置装回显微镜。

8.在LMD收集设备设置界面，点击 “移至参考点”，调节相机焦距使参考点成像清晰，必要时通过方向按键将参考点调至视野中央，进行收集设备位置校准。

9.组织切片面向下、标签朝右装入标本夹。

10.选用10倍物镜定位样本区域，进入激光菜单点击校准，弹窗选择确认。

11.设置激光参数（供参考）：Power 50、Aperture 5、Speed 9。

12.工具栏圈选目标区域，选择单一图形，点击开始切割；组织粘连无法自动掉落时，可选用手动裁切模式。警示：操作中禁止直视激光束，防止辐射损伤。

13.可通过软件菜单保存切割前后镜下画面。

14.收集足量细胞后卸下收集组件，再次向管盖补加提取缓冲液至终体积10μL，密封PCR管。

15.充分涡旋混匀收集管。

16.短暂离心，样品- 80℃保存待用。后续样本重复5～16步，切割结束可暂停实验，待统一提取RNA。