Access Agilent 应用文章--快速分析婴幼儿配方奶粉中的维生素 A、维生素 E 及微量维生素 D

中心切割法快速分析婴幼儿配方奶粉中的维生素 A、维生素 E 及微量维生素 D

作者

杨新磊，余彦海，李浪，肖尧

安捷伦科技（中国）有限公司

关键词

中心切割

奶粉

维生素

摘要

本文建立了在线中心切割法快速测定婴幼儿配方奶粉中的脂溶性维生素A、维生素 E 和维生素 D3。奶粉样品经过皂化、提取、过滤后直接进入中心切割系统进行分析，经过第一维分离后可直接得到VA 和 VE 的结果，VD 经过第一维初步净化后被切入第二维再进行分离、检测，整个分析过程仅需14 分钟且同时得到VA、VE 和VD 含量。方法线性良好，对于 VD3 的检出限可以达到 10 μg/kg（或400IU/kg）。同时，该方法重复性好，以样品为考察对象，连续 3 针进样，VA、VE 和VD 保留时间 R.S.D. < 0.30%，峰面积 R.S.D. < 0.81%。

前言

婴幼儿配方奶粉又称母乳化奶粉，为了满足婴儿的营养需要，需要添加各种营养成分，组成非常复杂。其中，常加的脂溶性维生素有维生素A、维生素 D 和维生素E，VA和 VE的添加量比较大，测定相对容易，VD 的添加量较少加之紫外吸收弱、基质干扰严重，测定起来非常麻烦。有文献方法 [1] 将样品皂化后用固相萃取小柱先净化、浓缩后再以液质联用法进行分离检测。国家标准方法[2] 测定婴幼儿配方奶粉中 VD 时先用正相液相色谱法进行纯化，收集VD保留时间的馏分，馏分挥干后复溶，再经过反相 HPLC 方法测定。整个过程非常麻烦且耗时较长，造成样品分析通量不高。本实验采用中心切割方法，利用第一维色谱柱在分析 VA 和VE 的同时对 VD 进行净化，再将初步进化后的VD 在线引入第二维色谱柱进行分离、测定，整个分析过程只需一次进样即可完成样品中VA、VE 及微量 VD 的测定。该方法不仅可以节省大量的制备工作，而且稳定性良好，可以用于配方奶粉中脂溶性维生素的常规快速测定。

实验部分

仪器配置

第一维：

1260 四元泵：P/NG1311B

1260 自动进样器：P/NG1329B

1260 柱温箱：P/NG1316A，内置 2 位-6 通阀

1260 二极管阵列检测器：P/NG4212B，配 10 mm 标准流

通池

第二维：

1260 脱气机：P/NG1322A

1260 二元泵：P/NG1312B

1260 二极管阵列检测器：P/N4212B，配 60 mm 超高灵

敏度流通池

软件：

OpenLab CDS ChemStation Edition C01.05[35]

HPLC方法

整个 HPLC 方法为中心切割的二维液相方法 (heart-cutting2DLC)，包含三个阶段：第一阶段为进样/分析维生素 A，此时阀的位置为1-2；第二阶段为净化/捕获维生素 D，阀在维生素D 出峰前切换到位置 1-6；第三阶段第一维继续分析维生素 E，第二维则分离检测维生素 D，阀在第一维维生素 D出峰结束后切回位置1-2，具体见下图 1。本方法第一维采用高效短柱（Zorbax RRHT Extend-C18，4.6 × 50 mm ×1.8μm）进行快速分析，第二维采用 PAH 专用柱（ZorbaxEclipse PAH，2.1 ×100 mm × 3.5 μm）以提高VD2 和 VD3的分离，同时第二维 DAD 检测器配备超高灵敏度流通池（ 60 mm 光程）以提高灵敏度，其他方法细节见表1。