你对咖啡因有多上瘾？强势围观！

前言

我们都知道腺苷被认为是调节睡眠的内稳态因子之一。当我们感觉非常累，觉得自己再不休息就要挂的时候，腺苷和腺苷受体结合发生各种反应，你的神经细胞活动减弱，随之就产生了睡意.....

接着我们来看看咖啡因这个小碧池都干了些什么！

咖啡因进入机体，与腺苷竞争受体，细胞感知不到腺苷，因此便起到了提神的效果。

咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。咖啡因可以让人们保持警觉，在如今这个永不掉线的纷繁世界里，保持警觉是多么重要！

咖啡因可以刺激大脑的快感中心，而且可以使人轻微上瘾。也许正是基于这些功能，咖啡因才被广泛添加于食品、饮料中。适度地使用咖啡因具有舒张血管、促进血液循环、预防高血压、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、减肥等药理和生理作用。迅速发展的含咖啡因食品行业已经引起了美国食品及药品管理局（FDA）的关注。尽管FDA尚未对咖啡因采取监管措施，而且认为一天摄入400毫克以下的咖啡因，“通常不会产生危及健康的负面影响”，但FDA目前正在重新考虑开始监管咖啡因，因为各家厂商在许多产品中，加入了高剂量的咖啡因，而且每份产品的量也很大。虽然听起来只有咖啡才像是含有咖啡因的，但各种能量饮料含有多种成分，因此实际效果可能比咖啡更强，像我们最能接触到的可乐也曾一度被爆出咖啡因含量过高。FDA担忧，全天累计摄入咖啡因过多可能导致依赖性。中国更是把提纯后的咖啡因列为“精神药品”管制，属于一种毒品。

目前有关咖啡因检测分析的研究报道不多，为此本文通过使用SPE 1000全自动固相萃取系统对人体血液中咖啡因进行回收率测定分析，探索血液咖啡因样本检测的方法。

关键字：SPE 1000，MV5，血液，咖啡因

1 实验过程

1.1 仪器与试剂

固相萃取仪：SPE 1000全自动固相萃取系统，莱伯泰科公司；

浓缩仪：MV5多通道平行浓缩系统，莱伯泰科公司；

高效液相色谱仪：LC600 二元高压梯度高效液相色谱，莱伯泰科公司；

固相萃取柱：Waters HLB 60mg/3mL ；

咖啡因标准储备液：100μg/mL ；

咖啡因标准工作液：取1mL标准储备液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL标准工作液；

甲醇（色谱纯，Fischer 公司）；

乙酸乙酯（AR. 北京化学试剂厂重蒸后使用）；

磷酸二氢钠（一水）（山东西亚化学工业有限公司）；

磷酸氢二钠（无水）（天津市化学试剂六厂）；

磷酸盐缓冲液 (pH=6): 12.1g 磷酸二氢钠和 1.75g 磷酸氢二钠溶于 1L 水中；

洗脱液：甲醇：乙酸乙酯=1:1（V:V）；

血液替代品：牛血清，市售。

1.2 全自动固相萃取过程

1.2.1 加标样品预处理

取血液样本1mL加入磷酸盐缓冲液1mL平衡，加入50μL标准工作液，混合均匀，加标浓度为500ng/mL，待固相萃取。

1.2.2 固相萃取浓缩过程

将加标样品置于SPE 1000的样品架上，按照图1的固相萃取方法进行血液中咖啡因的萃取净化。洗脱液经MV5在40℃下氮吹浓缩近干后，用流动相定容至1mL 。

图1 血液中咖啡因固相萃取方法

1.3 HPLC-UV分析

色谱柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm；

波长：272nm；

流速：1mL/min；

柱温：40℃；

进样量：20μL；

流动相：甲醇-水= 24：76

2 加标回收率结果

2.1 咖啡因标样色谱图

图2 为咖啡因标样的色谱图。

2.2 加标样品色谱图

图3为加标样品的色谱图，图4为空白样品色谱图，得到的加标回收率及平行性结果详见2.3。

图3 加标样品色谱图

图4 空白样品色谱图

2.3 加标回收率结果

通过计算得到该方法中咖啡因的加标回收率及平行性结果（见表1）。咖啡因的加标回收率为95.8~99.2%，平行性RSD 为1.6%。

表1 测定结果

4 结果与讨论

本方法用SPE1000全自动固相萃取系统与MV5多通道平行浓缩系统连用，对血液中咖啡因进行萃取净化，其加标回收率95.8~99.2%，重复性RSD为1.6%。在萃取和浓缩过程中，上样管、收集管和浓缩管是通用的，不需要液体转移，减少损失，便于操作，说明SPE1000与MV5联用适用于血液中咖啡因的检测，操作过程简便并且在回收率和平行性上表现优异。